Вы можете добавить товар в корзину, указав количество
Вид упаковки: полиэтиленовая банка
Питательная среда для культивирования лактобацилл при производстве пробиотических препаратов, выделения лактобактерий при бактериологических исследованиях клинического материала, пищевых и молочных продуктов. Смесь сухих компонентов в виде мелкодисперсного, гигроскопичного, светочувствительного порошка желтого цвета, фасовка 250 гр. рассчитана на приготовление 3,5 л плотной среды
Дифференциально-диагностический агар поддерживает обильный рост молочнокислых бактерий, имеет хорошо буферизованный богатый питательный состав. Включает гидролизат рыбной муки (ГРМ), мясной и дрожжевой экстракты — составляющие необходимый набор аминокислот и витаминов. Твин-80 обеспечивает жирными кислотами. Глюкоза — ферментируемый источник энергии. В качестве селективных ингредиентов включены цитрат аммония и ацетат натрия, подавляющие рост сопутствующих микроорганизмов, в том числе стрептококков и плесневых грибов.
В результате инкубирования колонии Lactobacillus spp. белые, блестящие, с ровными краями. Для подтверждения результатов культивирования применяют биохимические методы — оксидазный и каталазный тест, окрашивание по Граму
Состав среды: панкреатический гидролизат рыбной муки, мясной и дрожжевой экстракты, глюкоза, твин 80, калия дигидрофосфат, аммония цитрат, магния сульфат, натрия ацетат, марганца хлорид, агар.
В виде гомогенного сухого, легко растворимого порошка светло-желтого цвета.
Готовая среда желтого цвета, прозрачная.
Готовую среду необходимо использовать в течение 7 суток при температуре хранения +2. 8°С или не более 5 суток — при комнатной температуре.
Кислотность среды: при 25°С имеет рН 5,7±0,3.
Форма выпуска: сухой порошок в полиэтиленовых банках по 250 г.
Условия хранения: в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре +2. 30°C.
Срок годности — 2 года с даты производства, указанной на упаковке.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/09164
Вся представленная на сайте информация, касающаяся технических характеристик, наличия на складе, стоимости товаров, носит ознакомительный характер и ни при каких условиях не является публичной офертой, определяемой положением пунктом 2 статьи 437 Гражданского кодекса Российской Федерации. Всю подробную информацию о товарах, их наличии и стоимости Вы можете получить у менеджеров отдела клиентского сервиса.
На данном сайте используются файлы cookie (куки) в целях совершенствования работы сайта и получения аналитической информации. В случае несогласия, просим произвести соответствующие настройки в браузере или покинуть данный сайт. Оставаясь на www.art-medika.com, Вы принимаете нашу политику конфиденциальности. Заполняя форму заявки, Вы подтверждаете свое согласие на обработку персональных данных.
© 2012-2019 Арт-Медика оборудование, реагенты, изделия медицинского назначения для клинической лабораторной диагностики
источник
| Классы МПК: | C12N1/20 бактерии; питательные среды для них C12R1/225 Lactobacillus |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Автор(ы): | Терехов Владимир Иванович (RU) , Арушанян Артавазд Ягорович (RU) , Сердюченко Ирина Владимировна (RU) , Глущенко Сергей Геннадьевич (RU) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Патентообладатель(и): | Федеральное бюджетное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет» (RU) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Приоритеты: |
| Сухая питательная среда |  |
| для контроля стерильности | 33,0 |
| Пептон | 20,0 |
| Агар КД | 30,0 |
| Глюкоза | 18,0 |
| Цитрат аммония | 2,0 |
| Калия дигидрофосфат | 6,0 |
| Ледяная уксусная кислота | 1,32 |
| Раствор солей | 5,0 |
| Вода дистиллированная | до 1 л |
Раствор солей состоит из, масс.%:
| Сульфат магния 7-водный | 11,5 |
| Сульфат марганца 4-водный | 2,86 |
| Сульфат железа (2) 7-водный | 0,68 |
| Дистиллированная вода | остальное |
На данной среде хорошо растут различные молочнокислые бактерии, она обладает селективными свойствами, но ее недостатком является многокомпонентность и труднодоступность ряда ингредиентов.
Известна питательная среда для выделения лактобактерий (Пат. РФ № 2202609), которая содержит, г/л:
| Сернокислый марганец | 0,049-0,05 |
| Сернокислый магний | 0,19-0,20 |
| L-цистеин солянокислый | 0,095-0,10 |
| Калий фосфорнокислый 2-замещенный | 1,95-2,0 |
| Пептон | 4,9-5,0 |
| Глюкоза | 19,8-20,0 |
| Агар-агар | 14,9-15,1 |
| Стерильный мел | 9,9-10,0 |
| Гидролизат молозивной | |
| казеино-сывороточной массы | остальное |
На данной среде хорошо растут лактобактерии, индикация колоний которых осуществляется по расплавлению мела под колонией. Однако эта среда не обладает селективными свойствами, и на ней могут расти любые бактерии, в.ч. кишечная палочка или энтерококки, которые также могут вырабатывать кислоты и обесцвечивать среду под колониями. Она не прозрачная, что затрудняет описание выросших колоний. Кроме того, не всем лабораториям доступен гидролизат молозивной казеино-сывороточной массы.
Известна среда для выделения лактобактерий (Пат. РФ № 2213779), состав которой представлен в следующем виде, г/л:
| Панкреатический гидролизат казеина сухой | 15-30 |
| Экстракт кормовых дрожжей сухой | 3-7 |
| Глюкоза | 17-25 |
| Цистеин | 0,1-0,3 |
| Железо сернокислое 7-водное | 0,03-0,06 |
| Магний сернокислый 7-водный | 0,6-1,0 |
| Цитрат аммония | 1,5-3,5 |
| Калий фосфорнокислый 1-замещенный | 4,0-8,0 |
| Натрий лимоннокислый 3-замещенный | 6,0-8,5 |
| Натрий уксуснокислый плавленый | 7,0-8,0 |
| Агар микробиологический | 7-12,0 |
| Поваренная соль | 3,0-8,0 |
| Кристалвиолет | 0,002-0,0025 |
| Полимиксин М сульфат | 0,04-0,06 |
| Вода дистиллированная | остальное |
Среда обладает выраженной селективностью, готовится без стерилизации. Однако она имеет фиолетовую окраску, что затрудняет исследование колоний в проходящем свете, ряд компонентов дорогостоящ и труднодоступен.
Известна простая, легко воспроизводимая питательная среда для выделения молочнокислых бактерий (Квасников Е.И., Нестеренко О.А. Молочнокислые бактерии и пути их использования. — М.: Наука, 1975. — С.60-61, прототип). Данная среда состоит из, масс.%:
| Растительный отвар (капуста) | 10,0 |
| Пептон | 1,0 |
| Глюкоза | 2,0 |
| Этиловый спирт | 8-16 |
| Агар | 2,0 |
| Дистиллированная вода | остальное |
Недостатком данной среды является слабые ростовые и селективные свойства, в результате чего на ней в равной степени растут бактерии других родов, которые могут подавлять рост молочнокислых бактерий, особенно при их низкой концентрации в исследуемом материале.
Задачей предлагаемого изобретения является получение простой в приготовлении и экономичной питательной среды для выделения молочнокислых бактерий из фекалий животных.
Поставленная задача достигается тем, что предложена питательная среда для выделения лактобактерий, включающая капустный отвар, глюкозу, агар, отличающаяся тем, что в качестве дополнительных источников питания и селективности содержит молочную сыворотку, дрожжевой аутолизат и уксусную кислоту при следующем соотношении компонентов, масс.%:
| Молочная сыворотка | 9-10,0 |
| Дрожжевой аутолизат | 9-10,0 |
| Глюкоза | 1,9-2,0 |
| Уксусная кислота 70% | 0,14-0,16 |
| Агар | 1,8-2,0 |
| Капустный отвар | остальное |
Молочную сыворотку получали в условиях лаборатории, для чего в 1 л подогретого до 60-70°C молока с жирностью 2,5% при постоянном помешивании добавляли 2,5-3 мл 70% уксусной кислоты (эссенции), после створаживания сгусток казеина отделяли, а сыворотку фильтровали через ватно-марлевый фильтр и использовали для приготовления среды. Неиспользованный остаток сыворотки можно сохранить, подвергнув его автоклавированию при 115°C в течение 20 мин.
Дрожжевой аутолизат получали по Н.И.Розанову (Микробиологическая диагностика заболеваний сельскохозяйственных животных. М., Гос., из-во с.-х. литературы, 1952. — С.91).
Капустный отвар готовили по Квасникову (Квасников Е.И., Нестеренко О.А. Молочнокислые бактерии и пути их использования. — М.: Наука, 1975. — С.65).
Взятые компоненты питательной среды смешивают в колбе и доводят до кипения и кипятят 2-3 мин до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают во флаконы и автоклавируют 20 мин при 0,5 атм, после остывания среды до 45-50°С в нее вносят уксусную кислоту и разливают в чашки Петри. Готовая для использования среда прозрачная, светло-коричневого цвета, с приятным молочно-растительным с уксусным оттенком запахом, с pH 5,3-5,5.
Новизна заявленного предложения состоит в том, что разработана питательная среда, обладающая выраженными селективными свойствами по отношению к лактобактериям, на которой они дают хороший рост и формируют типичные для них колонии размером 1,5-2 мм. Селективные свойства среды обусловлены содержащейся в ее составе уксусной кислотой, к которой лактобактерии устойчивы, в то время как другие бактерии (стафилострептококки, энтеробактерии, псевдомонады, бациллы и др.) к этому веществу чувствительны.
Примеры конкретного получения питательной среды для выделения лактобактерии.
В качестве тест-штаммов использовали Lactobacillus plantarum, Escherichia coli и Staphylococcus aureus, выделенных из фекалий телят. Испытуемые культуры по отдельности выращивали на агаровых средах при температуре 37°C в течение 24 ч, после чего по оптическому стандарту мутности № 10 готовили 1 млрд взвесь каждого тест-штамма. После этого методом десятикратных серийных разведений в физиологическом растворе довели концентрацию микроорганизмов до 1000 микробных клеток в 1 мл. Из этого разведения отбирали по 0,1 мл и вносили в 3 чашки Петри с питательной средой. Посевы инкубировали в анаэростате с использованием газогенерирующих пакетов «Анаэрогаз» в течение 24 ч при 37°C, после чего учитывали количество выросших колоний.
Пример 1. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, масс.%: молочная сыворотка 7,0; дрожжевой аутолизат 7,0; глюкоза 1,7; уксусная кислота 70% 0,10; агар 1,4; капустный отвар — остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний лактобактерий составило в среднем 25, эшерихий 54 и стафилококков 33. Среда имеет мягкую консистенцию, что затрудняет работу с бактериологической петлей.
Пример 2. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, масс.%: молочная сыворотка 8,0; дрожжевой аутолизат 8,0; глюкоза 1,8; уксусная кислота 70% 0,12; агар 1,6; капустный отвар — остальное. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний лактобактерий составило в среднем 43, эшерихий 24 и стафилококков 17. Среда также имеет мягкую консистенцию.
Пример 3. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, масс.%: молочная сыворотка 9,0; дрожжевой аутолизат 9,0; глюкоза 1,9; уксусная кислота 70% 0,14; агар 1,8; капустный отвар — остальное. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний лактобактерий составило в среднем 56, эшерихий 0 и стафилококков 0. Среда имеет плотную консистенцию и не скарифицируется при работе бактериологической петлей.
Пример 4. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, масс.%: молочная сыворотка 10,0; дрожжевой аутолизат 10,0; глюкоза 2,0; уксусная кислота 70% 0,16; агар 2,0; капустный отвар — остальное. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний лактобактерий составило в среднем 62, эшерихий 0 и стафилококков 0. Среда имеет плотную упругую консистенцию и не скарифицируется при работе бактериологической петлей.
Пример 5. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, масс.%: молочная сыворотка 11,0; дрожжевой аутолизат 11,0; глюкоза 2,1; уксусная кислота 70% 0,18; агар 2,2; капустный отвар — остальное. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний лактобактерий составило в среднем 46, эшерихий 0 и стафилококков 0. Несмотря на хороший рост лактобактерий на данной среде, выросшие колонии более мелкие, чем на вариантах сред в примерах 3 и 4. Среда имеет плотную упругую консистенцию и не скарифицируется при работе бактериологической петлей.
Пример 6. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, масс.%: молочная сыворотка 12,0; дрожжевой аутолизат 12,0; глюкоза 2,2; уксусная кислота 70% 0,20; агар 2,4; капустный отвар — остальное. При таком соотношении ингредиентов количество выросших колоний лактобактерии составило в среднем 23, эшерихий 0 и стафилококков 0. На данном варианте среды рост лактобактерий более замедлен, а формирующиеся колонии значительно меньшего размера (0,5-0,7 мм), чем на вариантах сред в примерах 3 и 4, на которых тест-штамм лактобактрий формировал колонии размером 1-2 мм.
Пример 7. Исследовали фекалии от 30-дневного теленка. Для этого физиологическим раствором осуществили десятикратные разведения 1 г фекалий до значения 10 -9 . Из пробирок с разведением 10 -3 , 10 -5 , 10 -7 и 10 -9 отобрали 0,1 мл суспензии и засеяли на питательную среду, содержащую, масс.%: молочная сыворотка 9,0; дрожжевой аутолизат 9,0; глюкоза 1,9; уксусная кислота 70% 0,14; агар 1,8; капустный отвар — остальное. Через 24 ч инкубации при температуре 37°C в условиях повышенного содержания CO 2 учитывали рост бактерий. Из разведения 10 -3 на среде выросло 265 колоний, которые по морфологии соответствовали колониям лактобактерий, при микроскопии это были грамположительные палочки. Колоний, характерных для энтеробактерий, стафилококков, бацилл, не было. Из разведения 10 -5 выросло 96 колоний, типичных для колоний лактобактерий, при микроскопии колоний установлено, что их образовывали грамположительные палочки. Колоний, характерных для энтеробактерий, стафилококков, бацилл, не было. Из разведения 10 -7 и 10 -9 бактериальный рост полностью отсутствовал. Следовательно, в фекалиях теленка количество лактобактерий было 9,6·10 6 колониеобразующих единиц в 1 г.
Пример 8. Исследовали фекалии от 30-дневного теленка. Для этого физиологическим раствором осуществили десятикратные разведения 1 г фекалий до значения 10 -9 . Из пробирок с разведением 10 -3 , 10 -5 , 10 -7 и 10 -9 отобрали 0,1 мл суспензии и засеяли на питательную среду, содержащую, масс.%: молочная сыворотка 10,0; дрожжевой аутолизат 10,0; глюкоза 2,0; уксусная кислота 70% 0,16; агар 2,0; капустный отвар — остальное. Через 24 ч инкубации при температуре 37°C в условиях повышенного содержания CO 2 учитывали рост бактерий. Из разведения 10 -3 на среде выросло 215 колоний, которые по морфологии соответствовали колониям лактобактерий, при микроскопии это были грамположительные палочки. Колоний, характерных для энтеробактерий, стафилококков, бацилл, не было. Из разведения 10 -5 выросло 63 колонии, типичных для колоний лактобактерий, при микроскопии колоний установлено, что их образовывали грамположительные палочки. Колоний, характерных для энтеробактерий, стафилококков, бацилл, не было.
Из разведения 10 -7 и 10 -9 бактериальный рост полностью отсутствовал. Следовательно, в фекалиях теленка количество лактобактерий было 6,3×10 6 колониеобразующих единиц в 1 г.
Таким образом, полученные результаты позволяют определить оптимальные соотношения ингредиентов питательной среды для выделения лактобактерий, а именно — молочная сыворотка 9,0-10%; дрожжевой аутолизат 9,0-10%; глюкоза 1,9-2,0%; уксусная кислота 70% 0,14-0,16%; агар 1,8-2,0%; капустный отвар — остальное. Данная среда обеспечивает хороший рост лактобактерий при полном подавлении роста эшерихий, стафилококков и др. бактерий, а поэтому может использоваться в качестве селективной при выделении лактобактерий от животных.
источник
Питательная среда для выделения и культивирования лактобацилл, сухая.
Лактобакагар Оболенск Цена за упаковку 0,25 кг
по применению набора реагентов для бактериологических исследований
«Питательная среда для выделения и культивирования лактобацилл сухая
(Лактобакагар Оболенск)»
Набор реагентов «Питательная среда для выделения и культивирования лактобацилл сухая (Лактобакагар Оболенск)» предназначен для выделения и культивирования лактобацилл при бактериологическом исследовании в клинической лабораторной диагностике, пищевой микробиологии.
- характеристика
Лактобакагар представляет собой смесь сухих компонентов в виде мелкодисперсного, гигроскопичного, светочувствительного порошка желтого цвета.
Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.
2.1. Принцип действия
Совокупность компонентов, входящих в состав Лактобакагара, обеспечивает питательные потребности для роста лактобацилл и ингибиции отдельных видов микроорганизмов.
Лактобакагар представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:
| Панкреатический гидролизат рыбной муки ………… | 20,0 |
| Экстракт пекарских дрожжей ………………………… | 5,0 |
| Экстракт мясной или пептон сухой ферментативный | 5,0 |
| Д-глюкоза ……………………….……………………….. | 20,0 |
| Калий фосфорнокислый однозамещенный ……………… | 2,0 |
| Натрий уксуснокислый 3-водный …………………….. | 5,0 |
| Твин-80 ………………………………………………….. | 1,0 мл |
| Аммоний лимоннокислый однозамещенный ………… | 2,0 |
| Магний сернокислый 7-водный ……………………….. | 0,1 |
| Марганец хлористый 4-водный ………………….…….. | 0,05 |
| Агар микробиологический ……………………………………… | 13,0±2,0 |
- АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Лактобакагар Оболенск обеспечивает рост лактобацилл и полностью подавляет рост эшерихий и псевдомонас.
- МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
При анализе исследуемого материала – соблюдение СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV группы патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
- ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
- Термостат, обеспечивающий температуру 37 °С
- Весы лабораторные 2 класса точности
- Автоклав
- Пипетки стеклянные, позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
- Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
- Чашки Петри
- Вода дистиллированная
- Колбы
- Воронки стеклянные
- АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Объекты исследований в клинической и санитарной микробиологии.
- Проведение АНАЛИЗа
7.1. Приготовление питательной среды.
Препарат в количестве, указанном на этикетке, тщательно размешивают в 1 л дистиллированной воды, доводят до кипения и кипятят в течение 3 мин, периодически перемешивая, до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, стерилизуют автоклавированием при температуре (121±1) °С в течение 15 мин, охлаждают при комнатной температуре до (45-50) °С и разливают в стерильные чашки Петри слоем 4-5 мм. Перед посевом чашки со средой выдерживают в течение 48 ч при комнатной температуре.
Готовая питательная среда, разлитая в чашки Петри, прозрачная коричневого цвета.
Готовую среду можно использовать в течение 10 суток после её приготовления при условии хранения при температуре 2-8 °С и 5 суток при температуре хранения 18-25 °С.
7.2. Взятие, посев исследуемого материала проводят в соответствии с «Методическими рекомендациями по применению бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечными инфекциями, диагностике и лечению дисбактериоза кишечника», М., 1986.
7.3. Исследуемый материал засевают на чашки Петри и стерильным шпателем распределяют взвесь по поверхности среды.. Инкубируют 44-48 ч при температуре (37±1) °С в атмосфере 5-10 % содержания СО2 (свечной сосуд, СО2-инкубатор). При отсутствии СО2-инкубатора или свечного сосуда возможен посев исследуемого материала в толщу «Лактобакагара».
- УЧЕТ И РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Учет результатов проводят визуально через 44-48 ч инкубации при температуре (37±1) °С в атмосфере 5-10 % содержания СО2 . Лактобациллы вырастают в виде гладких, круглых, белых, полупрозрачных или сероватых колоний диаметром не менее 1 мм. Возможен также рост лактобацилл в виде шероховатых, уплощенных колоний.
При посеве исследуемого материала в толщу Лактобакагара лактобациллы вырастают в виде белых колоний чечевицеобразной формы внутри среды.
Энтерококки и дрожжеподобные грибы вырастают на Лактобакагаре также в виде гладких, круглых, белых и полупрозрачных колоний. Поэтому для идентификации лактобацилл необходима бактериоскопия мазков. В мазках, окрашенных по Граму, лактобациллы представляют собой грамположительные неспорообразующие палочковидные бактерии, форма которых варьирует от вытянутых палочек до коккобацилл, образующих короткие цепочки.
Питательная среда подавляет рост кишечной палочки, клебсиелл и псевдомонад.
Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее чем в трех повторностях.
- УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Лактобакагар необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30 С.
Срок годности – 2 года. Среда с истекшим сроком годности использованию не подлежит.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.
По вопросам, касающимся качества Лактобакагара в течение срока годности следует обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279 Оболенск, Московская обл., Серпуховский р-н, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», тел. (4967) 36-00-20, факс 36-01-16.
источник
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии, а именно к получению питательных сред для культивирования лактобактерий, и может быть использовано для производства пробиотических препаратов.
Известна питательная среда МРС, которая является классической для культивирования лактобактерий (Квасников Е.И., Нестеренко О.А. Молочнокислые бактерии и пути их использования. — М.: Наука, 1975. — С.64). Она включает, масс.%:
|
Среда обладает основными ростовыми свойствами, необходимыми для лактобактерий, но недостатком данной среды является труднодоступность и многочисленность компонентов, кроме того, она не позволяет получить достаточно высокую (свыше 10 9 КОЕ/мл) плотность роста лактобактерий.
Известна питательная среда для выделения лактобактерий (заявка №2012154888/10), включающая капустный отвар, глюкозу, агар, молочную сыворотку, дрожжевой аутолизат и уксусную кислоту при следующем соотношении компонентов, масс.%:
|
Недостатком данной среды является то обстоятельство, что она предназначена только для выделения лактобактерий из различного материала, однако она не позволяет получить значительную биомассу бактерий, а следовательно, не может быть использована для производства пробиотических препаратов.
Описана питательная среда, которая является наиболее близкой по сути предлагаемому изобретению и поэтому взята авторами за прототип, она включает отвар капусты — 500,0 мл, куда добавлены натрий фософорнокислый — 2,0 г, магний сернокислый — 1,0 г, пептон — 5,0 г, глюкоза — 10,0 г, лимоннокислый натрий — 10,0 г. При этом отвар капусты готовят следующим образом: 500,0 г свежей капусты кипятят 30 мин в 1 л водопроводной воды. В полученный отвар добавляют ингредиенты и стерилизуют (Дзержинская И.С. Питательные среды для выделения и культивирования микроорганизмов: Учебное пособие. — Астрахань: Издательство АГТУ, — 2008. — 236 с.).
Техническим результатом заявляемого изобретения является создание доступной, экономичной и легко воспроизводимой в любой микробиологической лаборатории питательной среды для культивирования лактобактерий.
Технический результат достигается тем, что получена питательная среда для культивирования лактобактерий, включающая отвар капусты, глюкозу и дополнительные источники питания, отличается тем, что в качестве дополнительных источников питания содержит кислотный гидролизат крови убойных животных, дрожжевой аутолизат и молочную сыворотку при следующем соотношении компонентов, масс.%:
|
Позитивное влияние дрожжевого аутолизата и сывороточных белков молока на рост лактобактерий и буферные свойства среды известно и широко используется в микробиологии и биотехнологии. Обоснованием ввода в питательную среду для культивирования лактобактерий кислотного гидролизата крови убойных животных является его химический состав, который включает заменимые и незаменимые аминокислоты и минералы в органической форме. В аминокислотный состав кислотного гидролизата крови входят (г/л): аспарагиновая аминокислота — 1,55-2,61, глутаминовая аминокислота — 2,46-3,43, серин — 1,24-1,62, глицин — 1,0-1,33, гистидин — 0,81-1,42, треонин — 2,10-3,38, аланин — 2,48-3,09, пролин — 0,57-0,69, аргинин — 1,74-2,05, тирозин — 0,16-0,68, метионин — 0,11-0,27, валин — 1,08-1,58, изолейцин — 0,77-1,20, лейцин — 1,77-2,48, фенилаланин — 1,55-1,94, лизин — 2,29-2,78. В минеральный состав кислотного гидролизата крови входят (мг/л): кальций — 500-700, магний — 130-200, железо — 80-125, цинк — 27-40, марганец — 0,6-1,7, медь — 0,53-0,8, кобальт — 0,10-0,17, селен — 0,008-0,01, йод — 0,0006-0,001. Использование кислотного гидролизата крови в составе питательной среды для лактобактерий исключает дополнительный ввод различных аминокислот и солей микро- и макроэлементов.
Сочетание в предлагаемой питательной среде компонентов растительного и животного происхождения за счет наличия всех необходимых питательных и стимулирующих ингредиентов обеспечивает высокую скорость роста лактобактерий и значительное накопление их биомассы в течение 24 ч. Предлагаемую питательную среду готовят следующим образом. Кислотный гидролизат крови предварительно раскисляют с помощью 10% раствора гидроксида натрия до pH 6,7-6,9, после чего добавляют в него дрожжевой аутолизат, молочную сыворотку, глюкозу и доводят объем до 100% отваром капусты. Полученную смесь нагревают до кипения, кипятят 5-7 минут, при необходимости доводят pH до 6,7-6,9, фильтруют через бумажный фильтр, разливают по флаконам и стерилизуют автоклавированием, получая питательную среду для культивирования лактобактерий со следующим соотношением компонентов, масс.%:
|
По сравнению с прототипом предлагаемая среда обогащена гидролизатом крови, дрожжевым аутолизатом и молочной сывороткой, что значительно улучшает ее ростовые свойства и обеспечивает высокую скорость роста лактобактерий и накопление их биомассы.
Ниже приведены примеры обоснования соотношения компонентов питательной среды для культивирования лактобактерий и ее сравнительную эффективность.
Пример 1. В качестве тест-объекта использовали Lactobacillus plantarum, выделенный из кишечного тракта теленка. Данный изолят культивировали на питательной среде следующего состава, масс %: кислотный гидролизат крови убойных животных 7,0, дрожжевой аутолизат 7,0, молочная сыворотка 7,0, глюкоза 1,7, отвар капусты — остальное. Посевная доза составляла 1000 клеток. Через 24 ч культивирования при 37°C концентрация бактерии составила 3,1×10 9 КОЕ/мл.
Пример 2. В качестве тест-объекта использовали Lactobacillus plantarum, выделенный из кишечного тракта теленка. Данный изолят культивировали на питательной среде следующего состава, масс %: кислотный гидролизат крови убойных животных 8,0, дрожжевой аутолизат 8,0, молочная сыворотка 8,0, глюкоза 1,8, отвар капусты — остальное. Посевная доза составляла 1000 клеток. Через 24 ч культивирования при 37°C концентрация бактерии составила 9,6×0 9 КОЕ/мл.
Пример 3. В качестве тест-объекта использовали Lactobacillus plantarum, выделенный из кишечного тракта теленка. Данный изолят культивировали на питательной среде следующего состава, масс %: кислотный гидролизат крови убойных животных 9,0, дрожжевой аутолизат 9,0, молочная сыворотка 9,0, глюкоза 1,9, отвар капусты — остальное. Посевная доза составляла 1000 клеток. Через 24 ч культивирования при 37°C концентрация бактерии составила 5,5×10 10 КОЕ/мл.
Пример 4. В качестве тест-объекта использовали Lactobacillus plantarum, выделенный из кишечного тракта теленка. Данный изолят культивировали на питательной среде следующего состава, масс %: кислотный гидролизат крови убойных животных 10,0, дрожжевой аутолизат 10,0, молочная сыворотка 10,0, глюкоза 2,0, отвар капусты — остальное. Посевная доза составляла 1000 клеток. Через 24 ч культивирования при 37°C концентрация бактерии составила 9,1×10 10 КОЕ/мл.
Пример 5. В качестве тест-объекта использовали Lactobacillus plantarum, выделенный из кишечного тракта теленка. Данный изолят культивировали на питательной среде следующего состава, масс %: кислотный гидролизат крови убойных животных 11,0, дрожжевой аутолизат 11,0, молочная сыворотка 11,0, глюкоза 2,1, отвар капусты — остальное. Посевная доза составляла 1000 клеток. Через 24 ч культивирования при 37°C концентрация бактерии составила 6,4×10 10 КОЕ/мл.
Пример 6. В качестве тест-объекта использовали изолят Lactobacillus plantarum, выделенный из кишечного тракта теленка. Данный изолят культивировали на питательной среде следующего состава, масс %: кислотный гидролизат крови убойных животных 12,0, дрожжевой аутолизат 12,0, молочная сыворотка 12,0, глюкоза 2,2, отвар капусты — остальное. Посевная доза составляла 1000 клеток. Через 24 ч культивирования при 37°C концентрация бактерии составила 7,9×10 10 КОЕ/мл.
Таким образом, результаты исследований позволили выявить оптимальные варианты соотношения компонентов питательной среды, обеспечивающие высокий выход биомассы лактобактерий при минимальных затратах — это среда, приготовленная по примерам 3 и 4.
Пример 7. Готовят питательную среду по примеру 3 и 4, а также среду-прототип, в которые вносят Lactobacillus plantarum в количестве 1000 клеток. Через 6, 12 и 24 ч из культуральных сред отбирают пробы для определения численности лактобактерий и pH среды. Результаты опыта представлены в таблице. Из данной таблицы видно, что заявляемая среда, приготовленная по примерам 3 и 4, превосходит по ростовым свойствам прототип, т.к. она спустя 12-24 ч содержала в 100-1000 раз больше клеток лактобактерий, чем прототип. Кроме того, заявляемая среда обладает большей буферностью, чем прототип, поскольку в ней при значительно большей численности лактобактерий значение pH только на 0,4 единицы было ниже. Этот показатель авторы также считают позитивным, т.к. резкое повышение кислотности среды приводит к быстрой гибели лактобактерий.
Таким образом, предлагаемая питательная среда обеспечивает интенсивный рост лактобактерий и накопление биомассы, а следовательно, может быть использована в исследовательских целях и для создания пробиотических препаратов.
Питательная среда для культивирования лактобактерий, включающая отвар капусты, глюкозу и дополнительные источники питания, отличающаяся тем, что в качестве дополнительных источников питания содержит кислотный гидролизат крови убойных животных, дрожжевой аутолизат и молочную сыворотку при следующем соотношении компонентов, масс.%:
источник
Исследование особенностей культивирования бактерий Lactobacillus sp. на различных средах. Сравнительный анализ эффективности ряда стандартных сред. Состав и характеристики оптимальной питательной среды для развития колоний молочнокислых бактерий.
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Изучение особенностей культивирования и подбор оптимальной питательной среды для Lactobacillus Sp
Популярность антибиотиков и их бесконтрольное применение привело к появлению большого количества мутагенных форм микроорганизмов с неблагоприятными функциями и высокой лекарственной устойчивостью [2].
Вследствие этого появилась проблема поиска новых препаратов для поддержания здоровья людей и животных. Возникла необходимость в препаратах, не вызывающих лекарственной устойчивости, обладающих выраженным антимикробным действием в том числе и в отношении к резистентным к антибиотикам штаммам микроорганизмов. Принципиальное решение проблемы известно давно. Оно заключается в создании пробиотиков — препаратов на основе микроорганизмов, которые оказывают антагонистический эффект на патогенную микрофлору [1].
Впервые термин «пробиотики» (от греческого pro bios — для жизни) был употреблен в области животноводства, им обозначались микробиологические препараты, которые состояли из живых микроорганизмов и перорально применялись для воздействия на животных. В первую очередь в состав пробиотических продуктов входили именно лактобактерии (например, L acidophilus, L. casei), а также бифидобактерии (В. bifidum, В. longum), которые считаются высокоэффективными пробиотическими микроорганизмами и являются составной частью нормальной микрофлоры кишечника.
Основным свойством молочнокислых бактерий, по которому их объединяют в отдельную обширную группу микроорганизмов, является способность образовывать в качестве главного продукта брожения молочную кислоту. Молочнокислые бактерии неподвижны, не образуют спор, положительно окрашиваются по Граму, не восстанавливают нитраты в нитриты. По форме клеток молочнокислые бактерии — палочки и кокки. Размеры их варьируют у отдельных видов [3].
Молочнокислые бактерии — это факультативные анаэробы. Также это — единственная группа микроорганизмов, которые лишены каталазы, но способны расти при этом в присутствии кислорода воздуха. Функцию каталазы выполняет фермент пероксидаза. Молочнокислые микроорганизмы получают энергию только в процессе молочнокислого брожения, поскольку у них отсутствуют гемсодержащие ферменты. Молочнокислое брожение подразделяется на гомоферментативное и гетероферментативное. При гомоферментативном брожении основным метаболитом является молочная кислота; при гетероферментативном брожении кроме молочной кислоты образуются также диоксид углерода, этанол и уксусная кислота.
Температурный диапазон жизнедеятельности лактобактерий довольно широк: мезофильные виды растут при оптимальной температуре 25-32°С; минимальной температурой для них является 10°С. Для термофильных видов оптимальная температура роста колеблется в пределах 38-45°С, а минимальная — 20-22°С. Имеются сведения, что некоторые молочнокислые бактерии способны расти при температуре 3-5°С [4].
Молочнокислые бактерии относятся к наиболее сложным организмам, с точки зрения потребности в питательных веществах. Для своей жизнедеятельности они требуют наличия субстратов, являющихся источником энергии и веществ, необходимых им для построения бактериальной клетки (нуклеиновых кислот, полисахаридов, аминосахаров и т.п.) [4].
Наиболее важным источником энергии для молочнокислых бактерий являются моно- и дисахариды — глюкоза, лактоза, сахароза, мальтоза. Для нормального роста и развития молочнокислых бактерий, как правило, необходимы субстраты со сложными органическими формами азота — подобранными смесями аминокислот, ферментативными или кислотными гидролизатами белков — мяса, казеина, различных сортов муки.
Независимо от вида и штамма молочнокислых бактерий, большинству из них также необходимы аргинин, цистеин, глутаминовая кислота, лейцин, фенилаланин, триптофан, тирозин, валин.
Большинство видов молочнокислых бактерий (особенно палочковидных) остро нуждаются для своего развития в витаминах, чем и объясняется в значительной мере влияние на их рост добавок к средам различных растительных экстрактов (картофеля, моркови, кукурузы и т. д.), дрожжевого автолизата и других соединений.
Для обеспечения роста и развития молочнокислые бактерии нуждаются в ряде неорганических соединений — меди, железе, натрии, калии, фосфоре, йоде, сере, магнии и, особенно, марганце [3].
Таким образом для культивирования молочнокислых микроорганизмов применяют следующие среды:
Обезжиренное молоко, которое получают сепарированием цельного молока или растворением сухого обезжиренного молока в теплой воде (100 г на 1 л).
Гидролизованное молоко. Обезжиренное молоко разводят водопроводной водой (1 часть молока и 2 части воды), затем к 1 л разведенного молока, подогретого до 45°С, добавляют 1 г сухого порошка панкреатина или 5 г поджелудочной железы, измельченной на мясорубке. Через несколько минут после внесения панкреатина к разведенному молоку добавляют 5 мл хлороформа.
Агар с мелом. Среду используют для выявления молочнокислых бактерий. К питательному агару добавляют мел, в количестве 2-3%, затем среду стерилизуют.
Среда Сабуро. Основой этой среды является дрожжевая вода. На 1 л водопроводной воды берут 20 г сухих дрожжей, кипятят 15 мин, фильтруют через бумажный фильтр, разливают во флаконы и стерилизуют. К 100 мл стерильной дрожжевой воды добавляют 1% пептона, 4% глюкозы, 2% агара и стерилизуют.
Среда МРС. Представляет собой среду желтого вида, в плотном или жидком состоянии. Среды классифицируются по содержанию агара (от 0,075% до 10%). Используется для выделения ацидофильных и молочнокислых бактерий.
Молочный агар. Используется для определения протеолитической способности микробов. В пробирку с расплавленным стерильным питательным агаром добавляют 1 — 2 мл стерильного обезжиренного молока, смешивают и разливают в чашки Петри.
Среда Эллингера. Используется для общего культивирования стрептококков и лактобацилл. Может быть как плотной, так и жидкой.
Trupticase yeast extract glucose medium. Многокомпонентная среда, в которую входят неорганические соединения, дрожжевой экстракт и гидролизат казеина.
Tomato juice agar. Жидкая среда для культивирования молочнокислых микроорганизмов. В состав входит томатный сок, дрожжевой экстракт и гидролизат казеина. Исходя из вышесказанного следует, что изучение особенностей культивирования Lactobacillus sp. в качестве основы для создания пробиотических продуктов является актуальным.
Материал и методика. Исследования проводились на кафедре биотехнологии, биохимии и биофизики, факультета перерабатывающих технологий Кубанского Государственного Аграрного Университета.
В качестве объекта исследования выбран концентрат бактериальный лиофилизированный для ферментированных молочных продуктов Пх(л), предоставленный ФГУП «Экспериментальная биофабрика Россельхозакадемии», расположенная по адресу: Россия, город Углич, ул. Старостина, 18. Штамм хранился в музее чистых культур кафедры биотехнологии, биофизики и биохимии.
В таблице 1 представлена характеристика бактериального концентрата Пх(л).
Титр определяли методом последовательных десятикратных разведений в физрастворе методом Коха и последующим посевом с инкубацией при оптимальных условиях. После проводился подсчет выросших колоний на Чашках Петри согласно ГОСТ 9225-84 (пункт 4.5.3).
Определение БГКП проводилось согласно методу определения бактерий группы кишечных палочек (ГОСТ 9225-84 (пункт 4.6.)).
Таблица 1 Органолептические показатели сухого бактериального концентрата
источник
студент, кафедра биотехнологии ПолесГУ,
студент, кафедра биотехнологии ПолесГУ,
студент, кафедра биотехнологии ПолесГУ,
студент, кафедра биотехнологии ПолесГУ,
В настоящее время во всем мире наблюдается тенденция к расширению спектра пробиотических культур, используемых в функциональном питании, и ужесточаются требования к данным культурам.
При контроле микроорганизмов для молочной промышленности лабораторная служба руководствуется целым перечнем методов, изложенных как в ГОСТированных, так и в отраслевых документах. Так же не существует и универсальной селективной среды для выделения из продуктов и одновременного разделения таксономически далеких друг от друга штаммов.
Цель данного исследования: изучить рост лактобацилл на селективных питательных средах.
Объекты исследований
Для изучения роста лактобацилл на различных селективных средах были отобраны и восстановлены 10 коллекционных штаммов разных видов лактообацилл: L.plantarum L31/1, L.casei Бф11, L.helveticus a28/4, L.acidophilus a35/2 и L35/6, L.rhamnosus pl25/1, L.gasseri L9/1, L.delbrueckii subsp. bulgaricus b18/2, L.delbrueckii subsp. lactis L39/4, L.fermentum L36/2.
Основные методы исследования
Микроскопический препарат определяли по ГОСТ 9225-85 [2].
Измерение рН проводили по ГОСТ 26781-85 [3].
Культивирование бактерий. Бактерии выращивали в жидких или агаризованных средах. Агаризованные среды содержали 0,15% — 2,0% агара. Инкубировали в термостате при различных температурах (30±1°С, 37±1°С, 42±1°С).
Для оценки роста микроорганизмов на различных средах бактерии, выращенные в среде ПГС, рассевали в пробирки с соответствующей селективной средой по шаблону, инкубировали при соответствующей температуре в течении 24 ч, 48 ч и 72 ч, после чего оценивали характер роста образующихся колоний.
Результаты исследований
Для бактерий рода Lactobacillus были выбраны четыре селективные среды: среда Бликфельда, среда Рогоза, среда МРС и среда ГО.
Лактобациллы – грамположительные палочки, отрицательные к каталазе, неподвижны, редко восстанавливают нитраты и в процессе метаболизма утилизируют глюкозу. Могут быть как гомоферментативными, продуцируя более 85% молочной кислоты из глюкозы, так и гетероферментативными, продуцируя молочную кислоту, CO2, этанол и/или уксусную кислоту в равных количествах [5].
При росте лактобацилл в жидких средах наблюдается помутнение среды, осаждение клеток вскоре после прекращения роста. Осадок однородный, изредка зернистый. Поверхностная пленка не образуется. На плотных питательных средах (агар с гидролизованным молоком, МРС-агар и др.) лактобациллы формируют округлые мелкие, размером 2-5 мм, гладкие блестящие колонии серо-белого цвета со сферообразной поверхностью. Колонии лактобацилл разных видов почти не различаются, однако в некоторых случаях наблюдаются колонии шероховатые, волокнистые и др. [4].
Был изучен рост 10 коллекционных штаммов лактобацилл на четырех селективных питательных средах (табл.1). Оценка характера роста исследуемых культур показала, что все виды исследуемых лактобацилл растут на указанных средах, за исключением L.fermentum L36/2, который не вырос на среде ГО.
L.plantarum, L31/1 L.casei Бф11, L.rhamnosus pl25/1, L.delbrueckii subsp. bulgaricus b18/2, L.delbrueckii subsp. lactis L39/4 характеризовались высоким титром (10 9 ) на всех питательных средах. У остальных культур (L.helveticus a28/4, L.acidophilus a35/2, L.acidophilus L35/6, L.gasseri L9/1) на всех питательных средах восьмая степень. L.fermentum L36/2 характеризовался хорошим ростом на Рогозе и МРС (1,4 х 10 9 и 1,7 х 10 9 соответственно) и отсутствием роста на среде ГО (табл.1).
В количественном соотношении все культуры характеризовались хорошим ростом на средах МРС и Рогоза. Лучший рост для культур: L.helveticus a28/4, L.acidophilus a35/2, L.acidophilus L35/6, L.gasseri L9/1, L.fermentum L36/2 лучший рост был отмечен на средах МРС и Рогоза. Остальные культуры (L.plantarum, L31/1 L.casei Бф11, L.rhamnosus pl25/1, L.delbrueckii subsp. bulgaricus b18/2, L.delbrueckii subsp. lactis L39/4) лучше росли на средах МРС и Бликфельда. L.helveticus a28/4 и L.gasseri L9/1 хуже остальных видов росли на среде Бликфельда, L.helveticus a28/4 и L.acidophilus L35/6 – на среде ГО (табл.1).
В результате исследований установлено, что на 3-х питательных средах (МРС, Рогоза, Бликфельда) растут все исследуемые лактобациллы. На среде ГО не зарегистрирован рост одного вида (штамм L36/2 L.fermentum).
На средах МРС и Рогоза все культуры характеризовались хорошим ростом. На средах Бликфельда и ГО характер роста исследуемых штаммов различался: L.helveticus a28/4 и L.gasseri L9/1 хуже остальных видов росли на среде Бликфельда, L.helveticus a28/4 и L.acidophilus L35/6 – на среде ГО (табл.1).
Рост штаммов рода Lactobacillus на различных питательных средах в течение 1 сут культивирования при 37ºС.
источник