Что такое антитела к гамма интерферону человека аффинно очищенные что это

Интерфероновый статус: как повысить?

Имунноиследования

При анализе на интерфероновый статус исследуется содержание в крови:

• Сывороточный интерферон – то есть совокупность всего интерферона в исследуемом объеме крови.
• Спонтанный интерферон.
• Альфа или индуцированный альфа ИФР.
• Гамма. Этот вид тщательно изучается при оценке состояния детей на возможное заражение их туберкулезом. Для этого проводятся Ппд-л – или туберкулин, используется для проведения пробы манту. В России пробы манту проводят ежегодно. Если повышается показатель гамма ИФР и Ппд л выносится диагноз об остро протекающем туберкулезном процессе. Иммунологическое исследование на проверку уровня ИФР гамма, одобрено после многих клинических исследованиях на мышах. Так после многих проверок было установлено, что ИФР гамма индуцируется плохо туберкулезе. Исследование с введением Ппд л проводимое для оценки клинического состояния иммунитета, проводится в несколько этапов, и результат оценивается по реакции, возникшей на коже. Точным этот метод все же назвать нельзя, возможна небольшая реакция на введенный ппд л из-за потери лимфоцитов. Исследование уровня ИФР гамма назначается часто дополнительно.

В теле человека синтезируется три типа:

• Альфа интерферон или интерферон I типа. Подходит для лечения от инфекций (например, герпес).
• Группа II типа. Это интерфероны гамма. Имеют меньше противопоказаний, отлично подходят для профилактики вирусных заболеваний.
• Группа III типа – бетта. Схожи по своему воздействию на альфа, подходят для облегчения состояния при вирусных инфекциях.

Повышенный интерферон свидетельствует о болезни человека, причем разные комбинации показателей свидетельствует о разных степенях заболеваний. Так, например, повышение сывороточного ИФН, в то время как ИФН альфа и/или гамма низкий говорит об острой стадии болезни.

Если после получения лабораторных исследований интерферон понижен, необходимо принимать меры, чтобы увеличить его содержание в крови.

Повышение интерферона

Повышение иммунитета напрямую связано с повышением уровня интерферона. Иммунитет человека бывает врожденным и приобретённым.

Способов повышения иммунитета много, это могут быть лекарственные препараты, предлагаемые официальной медициной, народные методы укрепления иммунитета и немаловажную роль в данном вопросе играет повседневный образ жизни. Если не беречь свой организм, и испытывать его возможности по максимуму вряд ли даже при регулярном приеме лекарств удастся оставаться здоровым.

Лекарственные препараты

Лекарства для повышения ИФР относят к группе индукторов. Индуцирующих лекарств много. Действующее вещество может быть как синтетического, так и натурального происхождения. Основная их задача — вызвать в организме синтез собственных ИФР. Эти препараты менее эффективны при воздействии на организм. В большей степени они подходят для использования не в критических случаях, а как средство профилактики от гриппа или ОРВИ. Препараты после курсового приема способны на долгое время обеспечить повышенный уровень интерферонов в крови.

Повышение интерферона лекарственными препаратами воздействуют не напрямую, они запускают сложный процесс в организме человека призванный индуцировать специфические гены, которые уже в свою очередь борются с заболеванием.

Делятся препараты на две основных группы:

• Естественные. Сюда входят ИФН альфа, гамма и бетта. Важно понимать сами интерфероны не борется с болезнью, они призваны повышать устойчивость иммунитета, заставлять его работать и в кратчайшие сроки избавлять организм от чужеродных клеток и вирусов.
• Рекомбинантные. Эти препараты имеют более сильное воздействие на организм. Вырабатывается данный препарат из крови человека. Такой метод не позволяет производить большое количество препарата. Известно несколько способов выведения этого компонента и все из них имеют свои недостатки. Если описать механизм производства в двух словах, то становится понятно, что в ИФР вырабатываемый микроорганизмами вводится ген человека. Как ни странно, но стоят такие лекарства дешевле естественных аналогов. Они имеют большой срок хранения. Подходят для людей разного возраста и для удобства выпускаются в разной лекарственной форме. Средства в продаже представлены как свободно опускающиеся, так и лекарства, продаваемые только по рецепту врача, чаще всего ко вторым относятся растворы для инъекций.

Методы народной медицины

Увеличить устойчивость иммунитета только средствами народной медицины не стоит. Но как дополнительная терапия, при внимательном изучении метода и безопасности его для здоровья, эти способы вполне пригодны. Во всем важна мера, не стоит перебарщивать с дозами принимаемых продуктов с целью сохранения своего здоровья. Важен не сам продукт, а та ценность, которую он несет для организма. Интерфероны это белки, для расщепления и усвоения белков важны аминокислоты. Важен и уровень употребляемых антиоксидантов и витаминов.

Образ жизни

На здоровье человека оказывает слияние несколько составляющих, в том числе и образ жизни. Это не значит, что нужно жить по строгому расписанию, но придерживаться общих правил стоит. Умеренные физические нагрузки, полноценный сон и отдых, режим питания, избегание мест общественного скопления особенно в периоды эпидемий. Отказ от вредных привычек и не полезной пищи. Все эти простые советы призваны улучшить качество жизни.

Препаратами для повышения уровня интерферонов в крови пользоваться стоит, но делать это необходимо в разумных количествах и лучше по совету врача.

Источник статьи: http://lekhar.ru/lekarstva/protivovirusnye/povysit-interferon/

Амиксин – индукция интерферонов альфа, бета, гамма и лямбда в сыворотке крови и легочной ткани

*Импакт фактор за 2018 г. по данным РИНЦ

Амиксин (тилорон) — низкомолекулярный синтетический индуктор синтеза интерферона (ИФН), относится к классу флуоренонов. Его способность при пероральном введении была впервые установлена в 1970 г. , [1]. Амиксин является наиболее изученным препаратом среди имеющихся сегодня на фармацевтическом рынке индукторов ИФН. Более чем опыт клинического применения свидетельствует о его безопасности и эффективности при широком круге заболеваний инфекционного и неинфекционного генеза [2]. Несмотря на разнообразие генетического материала вирусов, Амиксин, так же как ИФН, подавляет фундаментальные процессы их репродукции на стадиях, обязательных для всех вирусов: блокирует адсорбцию вирусов, синтез белков и сборку зрелых вирусных частиц, распознавая и дискриминируя вирусные информационные РНК от клеточных, подавляет внутриклеточное размножение вирусов. Именно поэтому к действию Амиксина чувствительны практически все РНК- или вирусы [3, 4].

Семейство ИФН является ключевым компонентом врожденного и адаптивного иммунитета, обеспечивающего первую линию защиты организма от различных инфекционных агентов [5].

В настоящее время идентифицированы 3 типа ИФН:

1. ИФН типа, включающие прежде всего ИФН -α, -β, которые в той или иной степени продуцируются всеми ядерными клетками, оказывают прямое противовирусное действие на репликацию вирусов в инфицированных клетках, предупреждают инфицирование окружающих и, активируя каскад антивирусных сигнальных путей, включают врожденный иммунитет и способствуют развитию соответствующих адаптивных иммунных ответов [6, 7].

2. ИФН типа — ИФН-γ, который продуцируется различными субпопуляциями и естественных киллеров — NK, регулируя гомеостаз в лимфоузлах и очагах инфекции, вызывает стимуляцию и обеспечивает функциональную эффективность специфического адаптивного иммунитета [8].

3. Недавно открытый тип ИФН (ИФН-λ) представлен ИФН — λ1, λ2, λ3 (известными также как интерлейкин , и IL28B), функционально тесно связан с ИФН типа, экспрессия рецепторов которых, однако, определяется на узком спектре клеток, ограничивая ответ на ИФН типа [9]. Мишенью ИФН-λ являются, прежде всего, эпителиальные клетки дыхательных путей и легких, тракта, половых органов, кожи, гепатоциты печени, РМВС и плазмоцитарные дендритные клетки [10–13]. Антивирусное действие ИФН типа дополняет и, более того, преобладает над таковым ИФН типа во входных воротах инфекции и не вызывает характерных для ИФН типа системных побочных эффектов [14].

Все 3 типа ИФН выполняют роль первой линии защиты организма не только при вирусных, но и бактериальных и паразитарных заболеваниях [15, 16]. Важно отметить, что ИФН продуцируются не только при различной инфекционной патологии, но и под действием ряда высоко- и низкомолекулярных соединений — индукторов ИФН [3, 4].

Известно, что Амиксин стимулирует выработку в организме эндогенных ИФН, которые в ранних исследованиях тестировались биологическим методом — по противовирусному действию — и были отнесены к ИФН -α, -β ( тип) и -γ ( тип) [2, 3]. Хотя первой мишенью контакта и воздействия Амиксина является тракт, где ведущую роль в продукции ИФН выполняют ассоциированные с тонким кишечником лимфоидные образования — GALT (gut associated lymphoid tissue) — пейеровы бляшки, иммунокомпетентные клетки кишечника обладают уникальной способностью к миграции, и потому их стимуляция вызывает активацию иммунной системы не только , но и легочного, урогенитального трактов и системного иммунитета [17]. Амиксин вызывает длительную циркуляцию в крови терапевтических доз ИФН, которые предотвращают инфицирование незараженных клеток и создают барьерное антивирусное состояние. Максимальная продукция ИФН в крови у людей после четырехкратного еженедельного приема Амиксина достигает в среднем 64–128 ед/мл и сохраняется до нед. включительно [18].

Для оптимизации клинического применения индуктора ИФН Амиксина представлялось целесообразным в рамках доклинического исследования, в строго контролируемых лабораторных условиях, основанных на принципах доказательной медицины, идентифицировать и провести сравнительное изучение индукции препаратом Амиксин ИФН -α ( тип), -β ( тип), -γ ( тип) и -λ ( тип) в сыворотке крови и легочной ткани экспериментальных животных с использованием современных методов определения типовой принадлежности индуцируемых ИФН. Также определить последовательность их продукции, продолжительность аккумуляции и установить зависимость динамики индукции — продукции ИФН , и типов в сыворотке и легочной ткани от дозы вводимого препарата. Подобные исследования препарата Амиксин ранее не проводились.

Цель настоящего исследования — идентифицировать на молекулярном уровне экспериментальные данные по индукции ИФН -α и -β ( тип), -γ ( тип) и -λ ( тип) в сыворотке крови и легочной ткани мышей препаратом Амиксин® (таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 125 мг (, Россия)) при его однократном пероральном (внутрижелудочном) введении в дозах: 20, 40, 400 мг/кг, рассчитанных эквивалентно разовой, максимальной суточной и суточной дозам для человека [19] и оценить динамику продукции ИФН -α, -β, -γ и -λ2/3 в сыворотке и легочной ткани мышей под действием препарата Амиксин в различных дозах в течение 120 ч, в 9 сроках исследований (0 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 24 ч, 48 ч, 72 ч, 96 ч, 120 ч).

Материалы и методы

Дизайн исследований

Исследования проводились в 2 этапа. Первый этап — в Институте органического синтеза Латвии (г. Рига), включал исследование динамики индукции и продукции ИФН -α, -β, -γ и -λ препаратом Амиксин в дозах 40 и 400 мг/кг в сыворотке крови мышей в течение 120 ч.

Второй этап — в лаборатории индукторов интерферона ФГБУ «ФНИЦЭМ им. » Минздрава России (г. Москва), включал исследование динамики индукции и продукции ИФН -α и -λ препаратом Амиксин в дозах 20, 40 и 400 мг/кг в легочной ткани мышей в течение 120 ч.

Животные

На первом этапе использовались самки 55 мышей линии СВА/СаОlaHsd весом 19–30 г, полученные из вивария Harlan Laboratories, Нидерланды.

На втором этапе — самки 85 мышей линии СВА/CaOlaHsd весом 18–20 г, полученные из питомника «Андреевка» (ФГБУ «НЦБМТ» РАМН).

Содержание животных

Содержание, питание и уход за животными в ходе эксперимента осуществлялись в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных», Приказ Минздравсоцразвития РФ от 23 августа 2010 г. № 708н. Этические принципы обращения с лабораторными животными соблюдались в соответствии с European Convention for the Protection of Vertebral Animals Used for Experimental and Other Scientific Purposes. CETS No.123. Перед исследованием животные подвергались карантину.

Исследуемый препарат

Амиксин® (тилорон) — лекарственная форма: таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 125 мг, (634009, Россия, г. Томск).

Процедура введения препарата

Исследуемый препарат растворяли в стерильной дистиллированной воде в концентрациях, соответствующих вводимым дозам: 20, 40, 400 мг/кг. Экспериментальные животные распределялись на 2 или 3 группы, соответственно этапу исследований и дозам вводимого препарата. Подбор животных в группы осуществлялся методом случайной выборки. Каждая доза препарата Амиксин вводилась мышам однократно перорально (внутрижелудочно) в объеме 50 мкл специальными дозированными зондами размерами, соответствующими физиологической длине пищевода экспериментальных мышей. На каждый срок исследования использовались по 3 мыши.

Получение образцов сыворотки и суспензии легочной ткани мышей

Мышей выдерживали под легким эфирным наркозом до исчезновения ноцицептивных рефлексов. Забор крови проводили методом декапитации в стерильных условиях. Образцы крови, полученные в каждый срок исследования, состояли из пула (смеси) крови от 3 мышей в объеме 3 мл (по 1 мл от каждой особи), из которого после центрифугирования в режиме 5000 об/мин 15 мин отбирали надосадочную сыворотку в объеме 1,0 мл в стерильные пробирки типа Эппендорф. Сыворотки крови мышей, соответствующие каждому сроку забора, разделяли на аликвоты по 0,3 мл в 3 стерильные пробирки Эппендорф, каждую из которых хранили при t -70°C до проведения соответствующего иммуноферментного анализа (ИФА). Для получения суспензии легочной ткани обескровленных мышей фиксировали на специальных парафиновых подложках, в асептических условиях вскрывалась грудная клетка, изолировались и извлекались легкие (правое и левое), которые последовательно трехкратно промывали в буфере Hepes и питательной среде № 199, взвешивали и размельчали сначала в ступке, а затем в специальном гомогенизаторе. Все процедуры проводились в кратчайшие сроки и на холоде. Разрушение клеток ткани легкого достигалось трехкратным замораживанием и оттаиванием. Готовилась 10% суспензия гомогената в питательной среде № 199. Супернатанты суспензии гомогената легочной ткани после низкоскоростного центрифугирования (при 1600 g в течение 30 мин) отбирали и замораживали при -70°С до последующего исследования методом ИФА.

Определение ИФН альфа, бета, гамма и лямбда в сыворотке и легочной ткани мышей

Содержание ИФН -α, -β, -γ и -λ2/3 в пробах сывороток и супернатантов 10% суспензии гомогенатов легочной ткани мышей определялось в 9 временных сроках (0 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 24 ч, 48 ч, 72 ч, 96 ч, 120 ч — 3 мыши в каждый срок) после однократного перорального (внутрижелудочного) введения Амиксина в дозах 20, 40, 400 мг/кг.

Количественное содержание ИФН -α, -β, -γ и -λ2/3 (/B) в сыворотке крови и надосадочной жидкости 10% суспензии легочной ткани c последующим пересчетом на 1 мл и 1 мг легочной ткани, соответственно, определялось методом ИФА с использованием следующих коммерческих согласно инструкции производителя:

• Mouse Interferon Alpha ELISA Kit; R & D Systems; США.
• Mouse IFN-β ELISA Kit; PBL Interferon Source; США.
• Mouse IFN-γ ELISA Kit; R&D Systems Europe LTD; Великобритания.
• DuoSet® ELISA; Mouse IL-28A/B (IFN-λ2/3) Kit; R&D Systems; CША.

Расчет оптической плотности исследуемых проб проводили на спектрофотометре — ридере Anthos Labtec c использованием вошера и шейкера (Instruments GmbH, Austria) с последующей обработкой и преобразованием данных оптической плотности в пикограммы в мл и мг (пкг/мл и пкг/ мг) по компьютерной программе Software ADAP. Все исследования проводили в повторах.

Статистическая обработка

Результаты подвергались статистической обработке путем расчета среднего арифметического значения (M) и стандартной ошибки к нему (±σ). Оценка статистической значимости различий при межгрупповых сравнениях производилась по двустороннему Стьюдента для независимых групп. Для статистических расчетов использовалась компьютерная программа Microsoft Excel 2009.

Результаты исследований

Индукция интерферонов альфа, бета, гамма и лямбда в сыворотке крови мышей препаратом Амиксин

Однократное пероральное введение Амиксина в дозах 40 и 400 мг/кг вызывало дозозависимую индукцию и продукцию ИФН -α и -λ2/3 в сыворотке крови мышей, максимальное содержание которых через 24 ч после введения препарата в дозе 40 мг/кг составляло 176±1,0 и 398±12,0 пкг/мл, а в дозе 400 мг/кг — 1337±93 и 2231±93 пкг/мл соответственно. Уровень продукции ИФН-λ2/3 в сыворотке крови мышей под действием Амиксина в дозе 40 и 400 мг/кг в этот срок значительно (в 7,5 и 5,6 раза соответственно) превышал таковой ИФН-α (рис. 1).

Сопоставимая динамика определялась в индукции под действием Амиксина и накоплении в крови ИФН -β и -γ, максимальный уровень которых достигался также через 24 ч после однократного введения препарата. Однако количественное содержание ИФН -β и -γ в сыворотке крови экспериментальных животных на пике продукции тестировалось на более низком уровне, чем таковое ИФН-α и -λ2/3. При дозе Амиксина 40 мг/кг максимальный уровень синтеза ИФН-β, как и ИФН-γ, в крови определялся на уровне фоновых терапевтических значений (8,1±4,3 и 4,4±1,2 пкг/мл соответственно). При дозе 400 мг/кг максимальные количества ИФН-β и -γ через 24 ч после введения препарата увеличивались в среднем в 10 раз относительно дозы 40 мг/кг, а относительно контроля — в 110 и 46 раз соответственно (рис. 2).

По совокупности результатов, представленных на рисунках 1 и 2, однократное пероральное введение Амиксина в дозах 40 и 400 мг/кг вызывало индукцию в сыворотке крови экспериментальных животных всех типов: -α, -β, -γ, -λ, но количественное содержание ИФН -λ и -α превосходило таковое ИФН-β и -γ в среднем в 10 раз.

Индукция интерферона альфа и лямбда в легочной ткани мышей препаратом Амиксин

По результатам первого этапа исследований были установлены индукция Амиксином всех типов ИФН в сыворотке крови мышей и преобладание в ней продукции ИФН-α и -λ2/3, на втором этапе исследований — более детально изучена динамика локальной продукции ИФН-α и -λ2/3 в легочной ткани мышей при введении препарата в дозах: 20, 40 и 400 мг/кг.

Инициация индукции ИФН-α в легочной ткани мышей выражалась в двухкратном повышении через 24 ч после введения Амиксина в дозе 400 мг/кг среднестатистических значений его выработки относительно нулевой точки, а максимальные количества (1125 пкг/мг) синтезировались и аккумулировались только через 48 ч после индукции той же дозой препарата (рис. 3).

Низкая доза препарата также вызывала двухкратное повышение содержания ИФН-α по сравнению с контролем через 96 ч после его введения. Увеличение дозы вводимого препарата до 40 мг/кг сопровождалось сокращением срока индукции максимальных количеств ИФН-α в легочной ткани мышей к 48 ч (595,0 пкг/мг), причем в течение последующих 24 ч синтез ИФН-α сохранялся на уровне 335,0 пкг/мг.

В целом, под действием различных доз Амиксина в легочной ткани мышей определялась дозозависимая, но более поздняя, относительно таковой в сыворотке крови, продукция ИФН-α (рис. 3).

Амиксин в возрастающих от 20 до 400 мг/кг дозах вызывал также индукцию продукции в легочной ткани мышей ИФН-λ, среднестатистические значения количественного содержания которого на пике продукции составляли от 675,0 до 1547,5 пкг/мг соответственно.

Из данных, представленных на рисунке 4, следует, что через 48 ч после введения Амиксина в низкой дозе — 20 мг/кг — в легочной ткани мышей определялось шестикратное повышение содержания ИФН-λ2/3 относительно контроля в нулевой точке. Увеличение дозы препарата до 40 мг/кг повышало содержание в легочной ткани мышей ИФН-λ2/3 до 1405,0 пкг/мг и сокращало срок индукции его максимальной продукции на 24 ч относительно низкой дозы. Иными словами, двухкратное увеличение дозы однократно вводимого Амиксина приводило к пропорциональному двухкратному повышению количества синтезированного ИФН-λ2/3 и обратно пропорциональному двухкратному сокращению срока достижения пика его продукции. Максимальная доза препарата — 400 мг/кг — смещала пик индукции ИФН-λ2/3 в легочной ткани мышей к 12 ч, а уровень его продукции достигал 1547,5 пкг/мг. При использовании Амиксина в дозах 20 и 40 мг/кг продолжительность синтеза ИФН-λ2/3 относительно нулевой точки и его аккумуляции в легочной ткани экспериментальных животных составляла 96 и 72 ч соответственно. Максимальная доза препарата — 400 мг/мг — вызывала более быстрый (12 ч) и значительный подъем продукции ИФН-λ2/3 (1547,5 пкг/мг), который сохранялся на достаточном уровне (347,5 пкг/мг) относительно контроля до 24 ч включительно.

Таким образом, динамика продукции ИФН-λ2/3 в легочной ткани мышей показала, что увеличение однократной пероральной дозы препарата Амиксин сокращает срок достижения пика продукции ИФН-λ2/3. В дозах 20, 40 и 400 мг/кг максимальный синтез ИФН-λ2/3 в легочной ткани тестируется соответственно через 48, 24 и 12 ч после введения препарата. Причем двухкратное повышение дозы Амиксина с 20 до 40 мг/кг вызывает более чем двухкратное увеличение количества синтезированного в легочной ткани ИФН-λ2/3 на пике его максимальной продукции — с 675,0±5,94 до 1405,0±9,86 пкг/мг соответственно. При последующем повышении дозы препарата с 40 до 400 мг/кг срок достижения максимальной продукции сокращается до 12 ч, но уровень его продукции практически сохраняется на уровне, достигнутом введением в дозе 40 мг/кг через 24 ч — 1547,5±3,70 и 1405,0±9,86 пкг/мг соответственно (рис. 4).

Сравнительная характеристика динамики продукции интерферонов альфа и лямбда в сыворотке и легочной ткани мышей препаратом Амиксин

Сравнительный анализ результатов индукции ИФН-α в сыворотке крови и легочной ткани мышей препаратом Амиксин в дозе 400 мг/кг показал значительное количественное преобладание его продукции (в 2,8 раза) в легочной ткани относительно таковой в сыворотке крови экспериментальных животных. Однако пик продукции ИФН-α в сыворотке крови определялся через 24 ч после однократного введения препарата, максимальная продукция ИФН-α в легочной ткани мышей тестировалась только через 48 ч. Иными словами, продукция ИФН-α под действием Амиксина определялась последовательно сначала в сыворотке крови (через 24 ч после введения), а затем в легочной ткани (через 48 ч после введения), но в значительно большем количестве (рис. 5).

Максимальный уровень продукции ИФН-λ2/3 в легочной ткани мышей под действием Амиксина в дозе 400 мг/кг достигался через 12 ч после введения препарата и составлял 1547,5±3,70 пкг/мг, а пик его продукции в сыворотке крови тестировался через 24 ч после введения препарата и составлял 2231±93 пкг/мл, что превышало содержание ИФН-λ2/3 в легочной ткани на пике его продукции в 1,4 раза. Иными словами, продукция ИФН-λ2/3 в легочной ткани опережала по сроку достижения максимального синтеза таковую в сыворотке крови мышей, но определялась на более низком уровне (рис. 6).

Таким образом, индукция и продукция ИФН-α в сыворотке крови опережает во времени таковую в легочной ткани на 24 ч, но на пике продукции значительно уступает по количественному содержанию (в 2,8 раза). А индукция и продукция ИФН-λ2/3 в легочной ткани опережает по времени таковую в сыворотке крови мышей на 12 ч, но на пике продукции количественно тестируется на более низком уровне, чем в сыворотке крови мышей (в 1,4 раза) (рис. 6).

Сравнительный анализ результатов индукции ИФН-α и -λ2/3 в сыворотке крови мышей под действием однократной дозы Амиксина 400 мг/кг показал, что срок достижения их максимальной продукции совпадает и определяется через 24 ч после введения препарата. Однако количественное содержание в крови ИФН-λ2/3 на пике его продукции в 5,6 раза превышает таковое ИФН-α (2231±93 и 398±12 пкг/мл соответственно) (рис. 7).

В легочной ткани мышей максимальный синтез ИФН-λ2/3 под действием Амиксина в той же дозе опережает по времени синтез ИФН-α на 36 ч и превосходит его количественно в 1,4 раза (1547±3,0 и 1125,0±14,43 пкг/мг соответственно) (рис. 8).

Обсуждение результатов исследований

По суммарным результатам проведенных исследований и их сравнительного анализа, препарат Амиксин в дозе 40 мг/кг (эквивалентной суточной дозе для человека) вызывает пролонгированную системную индукцию и продукцию ИФН-α, -β, -γ и -λ в сыворотке крови, максимальный уровень которых определяется уже через 24 ч после его введения, а фоновые значения сохраняются до 120 ч (5 сут) включительно. Одновременно Амиксин в дозе 40 мг/кг индуцирует пролонгированную локальную продукцию ИФН -λ и -α в легочной ткани экспериментальных животных, максимальный уровень которых тестируется соответственно через 24 и 48 ч после введения препарата и также сохраняется в терапевтических значениях до 96 и 120 ч включительно.

Динамика аккумуляции ИФН -α, -β, -γ и -λ в крови при использовании препарата Амиксин в дозе 400 мг/кг (эквивалентной курсовой для людей) повторяет таковую в дозе 40 мг/кг, но количественные показатели ИФН-α и -λ, синтезированных на пике продукции, увеличиваются в среднем в 2 раза, а ИФН-β и -γ — в 10 раз и сохраняются на уровне терапевтических значений в течение 120 ч. Максимальная локальная продукция ИФН-α в легочной ткани мышей под действием Амиксина в дозе 400 мг/кг определяется через 48 ч, а синтез максимальных количеств ИФН-λ2/3 увеличивается и ускоряется на 36 ч, опережая максимальную продукцию ИФН-α в легочной ткани при дозе препарата 400 мг/кг. В последующие сроки исследования — до 120 ч включительно, в легочной ткани экспериментальных животных определяется локальная продукция терапевтических количеств как ИФН-α, так и ИФН-λ.

Таким образом, однократный прием препарата Амиксин в дозе, эквивалентной суточной дозе для человека, в течение первых 24 ч включает синтез ИФН , и типов в крови и легочной ткани мышей. Повторные приемы Амиксина в указанной дозе (суммарно соответствующей курсовой дозе для человека) с интервалом 48 ч позволяют избежать характерного для индукторов ИФН феномена гипореактивности и обеспечивают постоянную максимальную выработку всех типов ИФН в крови и дополнительно — локальную в легочной ткани. Следует отметить также, что хотя по результатам исследований максимальная продукция ИФН-α и -λ2/3 в сыворотке крови мышей под действием Aмиксина в дозах 40 и 400 мг/кг тестируется одновременно — через 24 ч, количественные показатели продукции ИФН-λ2/3 превышают таковые ИФН-α в 7,6 и 5,6 раза соответственно. В легочной ткани мышей также всегда тестируется большее содержание ИФН-λ2/3, сроки достижения которого опережают таковое ИФН-α на 24 и 36 ч соответственно. Такая последовательность системной и локальной продукции ИФН-α и -λ в сыворотке крови и легочной ткани указывает на взаимно индуцирующий характер их взаимодействия, когда предварительно синтезированный в большем количестве ИФН-λ2/3 способствует и/или стимулирует индукцию и продукцию ИФН-α, и наоборот. Известно, что ИФН-α и -λ имеют общий механизм регуляции продукции и обладают взаимно индуцирующим действием [20–22].

Многочисленными исследованиями последних лет установлено также, что различные штаммы вируса гриппа, А, высокопатогенный штамм H1N1 (2009 г.), обладают повышенной чувствительностью к ИФН-α и -λ [11, 15, 23, 29], преобладающая продукция которых определяется и в проведенных нами исследованиях. Индуцированные препаратом Амиксин плюрипотентные молекулы ИФН , и типов могут оказывать как системное действие на организм в целом, так и, что особенно важно, адресное противовирусное действие на не только при гриппе, но и при других ОРВИ и выполняют ключевую роль в повышении барьерной защитной функции легочной ткани [12, 24–28, 30]. По последним научным публикациям, при инфицировании вирусом гриппа, А ИФН-λ в легочной ткани мышей также преобладает над продукцией ИФН-α [11, 12, 23], что указывает на его доминантную, защитную роль в очагах поражения гриппозной инфекцией. Корреляция результатов действия различных доз препарата Амиксин в условиях отсутствия инфицирования с аналогичными данными под действием вируса гриппа, А связана, вероятно, со сходством механизмов продукции ИФН-α и -λ, индуцированных вирусом и препаратом Амиксин, что в свою очередь является научным обоснованием профилактического и лечебного эффектов препарата, направленных на повышение противовирусной защиты входных ворот, и организма в целом как при гриппозной, так и других острых респираторных вирусных инфекциях. Не исключено также, что подобный механизм преобладания индукции Амиксином локальной продукции ИФН-α и -λ, и особенно ИФН-λ, в воротах инфекции и , может быть актуален при вирусных инфекциях кишечного и урогенитального трактов. Ведущая защитная роль локальной продукции ИФН-λ описана, в частности, при ротавирусной и генитальной герпетической инфекциях [10, 11, 14], тем более что ранее, в исследованиях кинетики синтеза под действием Амиксина ИФН в органах и тканях, также установлена опережающая во времени и количественно его продукция в последовательности: кишечник — печень — легкие — кровь [3, 17].

Заключение

В настоящей работе, впервые в строго контролируемых лабораторных условиях, соответствующих принципам доказательной медицины, идентифицированы все известные 3 типа ИФН, которые индуцируются препаратом Амиксин в крови и легочной ткани, подробно изучена динамика, последовательность и профиль их системной и локальной продукции. Согласно результатам проведенных исследований, препарат Амиксин является быстродействующим в первые 24 ч противовирусным средством эндогенной пролонгированной стимуляции выработки ИФН , и типов в крови и ИФН и типов в легочной ткани, которые в совокупности активируют собственные защитные силы легких и организма в целом, что свидетельствует о возможности профилактического применения препарата для предотвращения повторных ОРВИ. Преобладание аккумуляции ИФН-α и -λ в крови и, что особенно важно, ИФН-λ в легких, указывающее на его доминирующую роль в защите легочной ткани — ворот респираторной инфекции различного генеза, свидетельствует, что препарат Амиксин может и должен быть использован с лечебной целью как на ранних, так и на поздних стадиях развития ОРВИ для противовирусной защиты первой линии воздействия возбудителя на при ОРВИ. Многократное профилактическое или лечебное применение препарата Амиксин с минимальным интервалом 48 ч позволит ускорить и увеличить продукцию ИФН и избежать развития феномена гипореактивности.

Таким образом, на сегодняшний день препарат Амиксин является единственным среди зарегистрированных в РФ индукторов ИФН, для которого достоверно доказано действие на выработку всех типов ИФН в крови и и типов — в легочной ткани.

Индукция препаратом Амиксин эндогенных ИФН , и типов в крови и легочной ткани активирует врожденный и адаптивный иммунные ответы, сохраняет иммунный гомеостаз собственного организма и предотвращает и/или прерывает синтез вирусных нуклеиновых кислот и белков, не вызывая характерных для экзогенных препаратов ИФН побочных эффектов.

1. Mayer G.D., Kruger R.F. Tilorone hydrochloride: mode de action // Science. 1970 Vol. 169. P. 1214–1215.
2. Чижов Н.П., Смольская Т.Т., Байченко П.И. и др. Клинические исследования переносимости и интерферон-индуцирующей активности амиксина // Вопросы вирусологии. 1990. № 5. С. 411–414.
3. Тазулахова Э.Б. Закономерности индукции и продукции α-, β-, γ- интерферона: автореф. дисс. д.б.н. М., 1986.
4. Интерферон – 2011: Сборник научных статей. М., 2012.
5. Shapira S.D., Hacohen N. Systems biology approaches to dissect mammalian innate immunity // Curr. Opin. Immunol. 2011. Vol. 23. P. 2373–2377.
6. Hertzog P.J. Type 1 interferons as primers, activators and inhibitors of innate and adaptive immune responses // Immunol. Cell Biol. 2012. Vol. 90. P. 471–473.
7. Hervas-Stubs S., Perez-Garcia J.L. et al. Direct effects of type 1 interferons on cеlls of immune system // Clin. Cancer Res. 2011. Vol. 17. P. 2619–2627.
8. Choubey D., Moudgi K.D. Interferons in autoimmune and inflammatory diseases: regulation and roles // J. Interferon &Cytokine Research. 2011. Vol. 12. P. 857–865.
9. Hillyer Ph., Mane V.P. et al. Expression profiles of human interferon-alpha and interferon-lambda subtypes are ligand- and cell-dependent // Immunol. Cell Biol. 2012. Vol. 90. P. 774–783.
10. Mordstein M., Neugebauer E. et al. Lambda Interferon reders epithelial cells of respiratory and gastrointestinal tracts resistant to viral infections // J. Virol. 2010. Vol. 11. P. 5670–5677.
11. Durbin R.K., Kotenko S.V., Durbin J.E. Interferon induction and function at the mucosal surface // Immunol. Rev. 2013. Vol. 255. P. 25–39.
12. Jewell N.A., Cline T. et al. Lambda Interferon is the predominant interferon induced by Influenza A virus infection in vivo // J. Virol. 2010. P.11515–11522.
13. Donnelly R.P., Kotenko S.V. Interferon-Lambda: A new addition to an old Family // J. Interferon & Cytokine Research. 2010. Vol. 8. P. 555–564.
14. Kotenko S.V. IFN –λs // Curr. Opin Immunol. 2011. Vol. 23. P. 1–8.
15. Levy D.E., Marie I.J., Induction of type 1 and 3 interferon in response to viral infection // Curr. Opin. Virol. 2011. Vol. 1. P. 476–486.
16. Wang B.X., Fish E.N. The yen and yang of viruses and interferons // Trend Immunol. 2012. Vol. 33. P.190–197.
17. Григорян С.С., Ершов Ф.И., Поверенный А.М. и др. Особенности продукции интерферона при энтеральном введении индукторов интерферона // Вопросы вирусологии. 1988. №1. C. 67–70.
18. Григорян С.С., Иванова А.М., Ершов Ф.И. Противовирусная активность амиксина и его влияние на интерфероновый статус // Вопросы вирусологии. 1990. № 2. C. 138–140.
19. Миронов А.Н., Бунатян Н.Д. и др. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. М., 2012.
20. Iversen M.B., Paludan S.R. Mechanisms of type 3 interferon expression // J. Interferon & Cytokine Research. 2010. Vol. 8. P. 573–578.
21. Onoguchi K., Yoneyama M. et al. Viral infection activate type 1 and 3 interferon gene through a common mechanism // J. Biol.Chem. 2007. Vol. 282. P. 7576–7581.
22. Ank N., West H. et al. λ-Interferon ( IFN-λ ), a type 3 IFN, is induced by viruses and IFNs and displays potent antiviral activity against select virus infections in vivo // J. Virol. 2006. Vol. 80. P. 4501–4509.
23. Hermant P., Michiels Th. Interferon-λ in the context of viral infections; production, response and therapeutic implication // J. Innate Immune. 2014. Vol. 6. P. 563–574.
24. Okabayashi T., Kojima T., Masaki T. et al. Type 3 interferon, not type 1, is predominant interferon induced by respiratory viruses in nasal epithelial cells // Virus Res. 2011. Vol. 1–2. P. 360–366.
25. Mordsstein M., Neugebauer E., Ditt V. et al. Lambda interferon renders epithelial cells of respiratory and gastrointestinal tracts resistant to viral infections // J. Virol. 2010. Vol. 84 (11). P. 5670–5677.
26. Svetlikova D., Kabat P. et al. Influenza A virus replication is inhibited in IFN-λ2 and IFN-λ3 transfected or stimulated cells // Antiviral. Res. 2010. P. 329–333.
27. Khaitov M.R., Laza-Stanca V., Edwards M.R. et al. Respiratory virus induction of alpha-beta- and lambda interferons in bronchial epithelial cells and peripheral blood mononuclear cells // Allergy. 2009. Vol. 63(3). P. 375–386.
28. Wang J., Oberley-Deegan R., Wang Sh. et al. Differentiated human alveolar type 2 cells secrete antiviral IL-29 (IFN-λ1) in response to influenza A infection // J. Immunol. 2012. Vol. 182. P. 1296–1304.
29. Osterlund P., Pirhonen J., Ikonen N. et al. Pandemic H1N1 Influenza A virus highly sensitive to the antiviral action of interferons // J. Virol. 2010. P. 1414–1422.
30. Ank N., Iversen M. et al. An important role for type 3 interferon in TLR-induced antiviral activity // J. Immunol. 2008. Vol. 180. P. 2474–2485.

Только для зарегистрированных пользователей

Источник статьи: http://www.rmj.ru/articles/infektsionnye_bolezni/Amiksin__indukciya_interferonov_alyfa_beta_gamma_i_lyambda_v_syvorotke_krovi_i_legochnoy_tkani/