Вы можете добавить товар в корзину, указав количество
Производитель: HiMedia Laboratories
Вид упаковки: полиэтиленовая банка
Сердечно-мозговой солевой бульон является высокопитательной средой, которую применяют для стимуляции роста притязательных энтерококков и других микроорганизмов при выделении гемокультур и в патогенетических исследованиях
Состав среды основана на прописи Rosenow, включающую мозговую ткань и сахарный бульон. Высокопитательна и имеет достаточную буферность для получения роста широкого круга микроорганизмов. При добавлении 10% дефибринированной бараньей крови их можно использовать для выделения и культивирования Histoplasma capsulatum и других грибов. Введение в состав среды хлорида натрия придает среде дифференцирующие и/или селективные свойства в отношении микроорганизмов, устойчивых к экстремальному осмотическому давлению среды. Для селективного выделения грибов в среду рекомендуется добавлять гентамицин и/или хлорамфеникол.
Состав, грамм/ литр:
Настой мозга теленка 200,00;
Мясной настой (из говядины) 250,00;
Протеозопептон 10,00;
Глюкоза 2,00;
Натрия хлорид 5,00;
Натрия гидрофосфат 2,50.
Конечное значение рН (при 25ºС) 7,4 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок. Готовая среда имеет светло-янтарную окраску, прозрачна, без какого-либо преципитата.
Форма выпуска: непрозрачные водоотталкивающие пластиковые флаконы с навинчивающимся колпачком, который имеет внутреннюю крышку.
Хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке.
Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.
Этикетка на упаковке на русском языке. Зарегистрировано в МЗ и СР РФ.
источник
Бульон с сердечно-мозговой вытяжкой —
Brain heart broth for microbiology
Для культивирования различных патогенных микроорганизмов, требовательных к условиям роста. Среда полностью соответствует требованиям Standard Methods of Water and Wastewater (1992), DIN Norm 10163 по исследованию мяса и LMBG по контролю продуктов питания.
Среда составлена на основе среды Rosenow (1979), содержащей кусочки мозговой ткани, и может быть использована для культивирования многих требовательных к условиям роста бактерий, таких как стрептококки, пневмококки, менингококки и др. Добавление сыворотки крови позволяет культивировать гонококки.
Бульон с сердечно-мозговой вытяжкой удобно использовать для культивирования стафилококков перед постановкой теста на плазмокоагулазу. Рост анаэробов и микроаэрофильных бактерий значительно улучшается при добавлении небольшого количества агар-агара (0,05-0,2%) к бульону.
Питательный субстрат (экстракты из мозговой и сердечной тканей и пептоны) 27,5; глюкоза 2,0; хлористый натрий 5,0; натрий фосфорнокислый двузамещенный 2,5.
Растворить 37 г среды в 1 л дистиллированной воды, дать среде набухнуть в течение 20-30 минут; автоклавировать 15 мин при 121°С. рН 7,4±0,2 при 25°С. Бульон прозрачный коричневого цвета.
Ход исследования
Зависит от целей исследования.
Streptococcus pyogenes ATCC 19615
хороший / очень хороший, аэробно или анаэробно
Streptococcus pneumoniae ATCC 6305
хороший / очень хороший, аэробно или анаэробно
Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853
хороший / очень хороший, аэробно
Candida albicans ATCC 60193
хороший / очень хороший, аэробно
хороший / очень хороший, аэробно
хороший / очень хороший, микроаэрофильные
источник
Сердечно-мозговой бульон с 0,1% агар-агара
Общая плотная среда для различных чувствительных патогенных микроорганизмов для клинических образцов.
Сердечно-мозговой бульон используется для культивирования стрептококков, пневмококков, менингококков и др. высокочувствительных микроорганизмов. Также рекомендуется для культивирования патогенных грибов.
Рост сопутствующей бактериальной флоры может быть угнетен путем добавления в среду 20 МЕ пенициллина и 40 мкг стрептомицина.
Если эта среда используется для селективного выделения прихотливых грибов (особенно Histoplasma capsulatum и Blastomyces), то для этого добавляют 10% стерильной дефибринированой крови, а также 0,5 мкг/мл циклохексимида и 0,5 мкг/мл хлорамфеникола.
Эта среда не предназначена для наблюдения характерной гемолитической реакции, даже после добавления в нее крови, так как среда содержит глюкозу.
Приготовление
Развести 37 г порошка в 1 л дистиллированной воды и вскипятить. Разлить в соответствующие флаконы или пробирки и стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС.
Среда предназначена только для использования в лабораториях. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности Контроль качества
Температура инкубации: 35°C ± 2,0
Время инкубации: 24-48 часов
Инокуляция: 10-100 КОЕ. Метод посева: спиральный (согласно стандарту ISO/TS 11133-1/2)
источник
Система однофазная для гемокультур с сердечно-мозговой вытяжкой и 0,05% СПС (для взрослых) 10 фл (2009/03708)
Вы можете добавить товар в корзину, указав количество
Производитель: HiMedia Laboratories
Вид упаковки: картонная коробка
Однофазные системы HiSafe™ Blood Culturing System с готовыми средами на основе сердечно-мозгового экстракта, дополненные 0,05% SPS (полианетол сульфонат натрий), для эффективного, быстрого, простого выделения и предварительной идентификации широкого спектра микроорганизмов. Питательный бульон в стеклянном флаконе объемом 70 мл. Объем минимальной партии — не менее трех упаковок (30 флаконов)
Качественный тест для культивирования микроорганизмов крови.
Сердечно-мозговой бульон богат питательными веществами и хорошо буферизован, полезен для выращивания самых разнообразных микроорганизмов, предпочтителен при культивировании анаэробных бактерий, дрожжей и плесневых грибов. Он также используется для приготовления инокулята для тестирования чувствительности к противомикробным препаратам. Бульон является модификацией прописи Rosenow, где он добавил кусочки тканей мозга к бульону из декстрозы. С добавлением 10% дефибринированной овечьей крови, применяется для изоляции и культивирования Histoplasma capsulatum и других грибов. При селективном выделении грибов рекомендовано добавлением гентамицина и/или хлорамфеникола.
Протеаза пептон, настой из мозга теленка и говяжьего сердца служат в качестве источников углерода, азота, незаменимых факторов роста, аминокислот и витаминов, декстроза – энергии. Динатрийфосфат оказывает буферное действие, тогда как хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Для инактивации бактерицидных свойств крови используется полианионный антикоагулянт натрия полианетол сульфонат (Sodium polyanethol sulphonate). SPS так же подавляет активность стрептомицина, полимиксина В, канамицина и гентамицина.
Флаконы комплектуются специальными иглами с воздушным фильтром (LA038). Аналогичная система для детей LQ004
Состав, грамм/литр:
Настой из мозга теленка 20,0,
Настой из мозга и говяжьего сердца 17,5,
Панкреатический перевар желатина 3,5,
Протеазопептон 2,0,
Калия гидрофосфат 2,5,
Декстроза 2,0,
Натрия хлорид 5,0,
Пиридоксаля гидрохлорид 0,10,
Натрия полианетолсульфонат 0,5
Менадион 0,10.
Конечное значение рН (при 25°С) 7,4 ± 0,2.
Светло-янтарного цвета прозрачный раствор.
Хранить при температуре от +2. 8°C. Использовать до даты, указанной на этикетке.
Срок годности — 1 год с момента изготовления.
Упаковка: 10 стеклянных флаконов в картонной коробке.
Продукция зарегистрирована в ФСЗ (ОКП 9385). Каждая упаковка имеет полиграфическую этикетку с инструкцией по применению на русском языке.
источник
Сердечно-мозговой бульон применяют для стимуляции роста прихотливых кокков и других микроорганизмов при выделении гемокультур и в патогенетических исследованиях.
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Размешать 37,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Разлить в пробирки или флаконы и стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Для получения наилучших результатов среду рекомендуется использовать в день приготовления. В противном случае перед использованием ее надо прокипятить или несколько минут прогреть текучим паром, а затем остудить.
Оригинальную среду разработал Rosenow (1) путем добавления мозговой ткани к сахарному бульону. Эта среда высокопитательна и имеет достаточную буферность для получения роста широкого круга микроорганизмов (2, 3, 4). Она рекомендована также международным комитетом для исследования на золотистый стафилококк (5).
При добавлении соответствующих компонентов среду можно использовать для заданных целей. Например, после введения 6,5% хлорида натрия ее можно использовать в качестве селективной для энтерококков и других галотолерантных бактерий. Добавление к среде 0,1% агар-агара способствует росту микроаэрофильных и анаэробных микроорганизмов. При добавлении 10% бараньей крови ее можно использовать для выделения и культивирования широкого круга грибов, в частности возбудителей системных микозов из клинического материала. Для селективного выделения грибов в среду рекомендуется добавлять гентамицин и/или хлорамфеникол (6). Эту среду используют также для приготовления инокулюма в тестах на чувствительность к антибиотикам.
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Среда имеет светло-янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует.
При 25°С водный раствор (3,7% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35°С.
источник
Вы можете добавить товар в корзину, указав количество
Производитель: HiMedia Laboratories
Вид упаковки: картонная коробка
Однофазная система HiSafe™ Blood Culturing System содержит готовую питательную среду на основе сердечно-мозгового настоя. Предназначена для эффективного, быстрого и простого выделения гемокультур и предварительной идентификации широкого спектра микроорганизмов без рутинных методов микробиологического культивирования. В стеклянном флаконе объемом 20 мл. Реализуются в количестве от трех упаковок (30 флаконов)
Качественный тест для культивирования микроорганизмов в крови.
Сердечно-мозговой бульон богат питательными веществами и хорошо буферизован, полезен для выращивания самых разнообразных микроорганизмов, предпочтителен при культивировании анаэробных бактерий, дрожжей и плесневых грибов. Он также используется для приготовления инокулята для тестирования чувствительности к противомикробным препаратам. Бульон является модификацией прописи Rosenow, где он добавил кусочки тканей мозга к бульону из декстрозы. С добавлением 10% дефибринированной овечьей крови, применяется для изоляции и культивирования Histoplasma capsulatum и других грибов. При селективном выделении грибов рекомендовано добавлением гентамицина и/или хлорамфеникола.
Протеаза пептон, настой из мозга теленка и говяжьего сердца служат в качестве источников углерода, азота, незаменимых факторов роста, аминокислот и витаминов, декстроза – энергии. Динатрийфосфат оказывает буферное действие, тогда как хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Для инактивации бактерицидных свойств крови и обеспечения роста бактерий в качестве нетоксичного антикоагулянта применяется натрия полианетолсульфонат (SPS), полезность которого для выделения гемокультур была показана Van Haebler и Miles. SPS подавляет активность стрептомицина, полимиксина В, канамицина и гентамицина.
Флаконы комплектуются специальными иглами с воздушным фильтром (LA038). Такие же однофазные системы во флаконах для взрослых LQ003A, системы аналогичного состава c 0,05% SPS LQ004 и LQ004A
Состав, грамм/литр:
Панкреатический перевар желатина 17,5;
Настой из мозга теленка и говяжьего сердца 17,5;
Протеаза пептон 2,0;
Декстроза 0,16;
Хлорид натрия 0,39;
Натрия гидрофосфат 2,5;
Натрия полианетолсульфонат 0,25.
Конечное значение рН (при 25°С) 7,4 ± 0,2.
Рекомендованный объем пробы: 1-3 мл крови
Хранить при температуре +2. 8°C. Использовать до даты, указанной на этикетке.
Срок годности — 1 год с даты изготовления.
Упаковка: 10 стеклянных флаконов в картонной коробке.
Продукция зарегистрирована в ФСЗ (ОКП 9385). Каждая упаковка имеет полиграфическую этикетку с инструкцией по применению на русском языке.
источник
Вы можете добавить товар в корзину, указав количество
Производитель: HiMedia Laboratories
Вид упаковки: картонная коробка
Однофазная готовая среда HiSafe™ Blood Culturing System с сердечно-мозговым экстрактом, дополненная 0,05% SPS натрия полианетол сульфонат, предотвращающий свертывание крови и бактерицидное свойство свежей сыворотки. Эффективное, быстрое, простое выделение и предварительная идентификация широкого спектра аэробных микроорганизмов. В стеклянном флаконе объемом 20 мл. Минимальный объем продажи — от трех упаковок (30 флаконов)
Качественный тест для культивирования микроорганизмов крови.
Сердечно-мозговой бульон богат питательными веществами и хорошо буферизован, полезен для выращивания самых разнообразных микроорганизмов, предпочтителен при культивировании анаэробных бактерий, дрожжей и плесневых грибов. Он также используется для приготовления инокулята для тестирования чувствительности к противомикробным препаратам. Бульон является модификацией прописи Rosenow, где он добавил кусочки тканей мозга к бульону из декстрозы. С добавлением 10% дефибринированной овечьей крови, применяется для изоляции и культивирования Histoplasma capsulatum и других грибов. При селективном выделении грибов рекомендовано добавлением гентамицина и/или хлорамфеникола.
Протеаза пептон, настой из мозга теленка и говяжьего сердца служат в качестве источников углерода, азота, незаменимых факторов роста, аминокислот и витаминов, декстроза — энергии. Динатрийфосфат оказывает буферное действие, тогда как хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Для инактивации бактерицидных свойств крови и обеспечения роста бактерий в качестве нетоксичного антикоагулянта применяется Sodium polyanethol sulphonate, полезность которого для выделения гемокультур была показана Van Haebler и Miles. SPS подавляет активность стрептомицина, полимиксина В, канамицина и гентамицина.
Флаконы комплектуются специальными иглами с воздушным фильтром (LA038). Аналогичные системы для взрослых LQ004A
Состав, грамм/литр:
Настой из мозга теленка 20,0,
Настой из мозга и говяжьего сердца 17,5,
Панкреатический перевар желатина 3,5,
Протеазопептон 2,0,
Калия гидрофосфат 2,5,
Декстроза 2,0,
Натрия хлорид 5,0,
Пиридоксаля гидрохлорид 0,10,
Натрия полианетолсульфонат 0,5,
Менадион 0,10.
Конечное значение рН (при 25°С) 7,4 ± 0,2.
Светло-янтарного цвета прозрачный раствор.
Хранить при температуре от +2. 8°C. Использовать до даты, указанной на этикетке.
Рекомендованная проба: 1-3 мл крови.
Срок годности — 1 год с момента изготовления.
Упаковка: 10 стеклянных флаконов в картонной коробке.
Продукция зарегистрирована в ФСЗ (ОКП 9385). Каждая упаковка имеет полиграфическую этикетку с инструкцией по применению на русском языке.
источник
Агар с сердечно-мозговой вытяжкой —
Brain heart agar for microbiology
Для культивирования различных патогенных микроорганизмов, требовательных к условиям роста. Среда полностью соответствует требованиям Standard Methods of Water and Wastewater (1992), DIN Norm 10163 по исследованию мяса и LMBG по контролю продуктов питания.
Среда составлена на основе среды Rosenow (1979), содержащей кусочки мозговой ткани, и может быть использована для культивирования многих требовательных к условиям роста бактерий, таких как стрептококки, пневмококки, менингококки и др. Добавление сыворотки крови позволяет культивировать гонококки.
Бульон с сердечно-мозговой вытяжкой удобно использовать для культивирования стафилококков перед постановкой теста на плазмокоагулазу. Рост анаэробов и микроаэрофильных бактерий значительно улучшается при добавлении небольшого количества агар-агара (0,05-0,2%) к бульону.
На основе агара с сердечно-мозговой вытяжкой Queiroz (1987) разработал селективный агар для культивирования Campylobacter pylori — Belo Horisont Medium (BMН).
Агар с сердечно-мозговой вытяжкой подходит для культивирования не только бактерий, но и патогенных грибов. Рост сопутствующей бактериальной микрофлоры может быть подавлен добавлением 20 IU пенициллина и 40 мкг стрептомицина на 1 мл среды. Если данную среду планируется использовать для селективного выделения требовательных к условиям роста грибов (особенно Histoplasma capsulatum и Blastomyces) из образцов со смешанной инфекцией, то следует добавить 0,05 мкг/мл циклогексимида и 0,5 мкг/мл хлорамфеникола.
Эта среда менее пригодна (из-за содержания в ней глюкозы) для идентификации гемолитических форм, для которых следует добавлять кровь.
Питательный субстрат (экстракты из мозговой и сердечной тканей и пептоны) 27,5; глюкоза 2,0; хлористый натрий 5,0; натрий фосфорнокислый двузамещенный 2,5; агар-агар 15,0.
Растворить 52 г среды в 1 л дистиллированной воды, дать среде набухнуть в течение 20-30 минут; автоклавировать 15 мин при 121°С. рН 7,4±0,2 при 25°С. Среда прозрачная, иногда слабо опалесцирует, коричневого цвета.
Ход исследования
Зависит от целей исследования.
Streptococcus pyogenes ATCC 12344
Streptococcus pneumoniae ATCC 6301
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Erysipelothrix rhusiopathiae ATCC 19414
Lactobacillus acidophilus ATCC 4356
Clostridium perfringens ATCC 10543
хороший / очень хороший (анаэробно)
Clostridium sporogenes ATCC 11437
хороший / очень хороший (анаэробно)
источник
Вы можете добавить товар в корзину, указав количество
Производитель: HiMedia Laboratories
Вид упаковки: картонная коробка
Однофазная готовая среда HiSafe™ Blood Culturing System на основе питательного сердечно-мозгового настоя для эффективного, быстрого — в течение суток, простого — в один этап выделения из клинических образцов крови взрослых и предварительной идентификации аэробных гемокультур. В стеклянном флаконе объемом 70 мл. Минимальный заказ от 3х упаковок (30 флаконов)
Качественный тест для культивирования широкого спектра микроорганизмов в крови.
Сердечно-мозговая вытяжка богата питательными веществами, бульон хорошо буферизован, полезен для выращивания самых разнообразных микроорганизмов, предпочтителен при культивировании анаэробных бактерий, дрожжей и плесневых грибов. Он также используется для приготовления инокулята для тестирования чувствительности к противомикробным препаратам. Бульон является модификацией прописи Rosenow, где он добавил кусочки тканей мозга к бульону из декстрозы. С добавлением 10% дефибринированной овечьей крови, применяется для изоляции и культивирования Histoplasma capsulatum и других грибов. При селективном выделении грибов рекомендовано добавлением гентамицина и/или хлорамфеникола.
Протеаза пептон, настой из мозга теленка и говяжьего сердца служат в качестве источников углерода, азота, незаменимых факторов роста, аминокислот и витаминов, декстроза – энергии. Динатрийфосфат оказывает буферное действие, тогда как хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Для инактивации бактерицидных свойств крови и обеспечения роста бактерий в качестве нетоксичного антикоагулянта применяется натрия полианетол сульфонат (SPS), полезность которого для выделения гемокультур была показана Van Haebler и Miles. SPS подавляет активность стрептомицина, полимиксина В, канамицина и гентамицина.
Флаконы комплектуются специальными иглами с воздушным фильтром (LA038). Такие же однофазные системы во флаконах для детей LQ003, системы аналогичного состава c 0,05% SPS LQ004 и LQ004A
Состав, грамм/литр:
Панкреатический перевар желатина 17,5;
Настой из мозга теленка и говяжьего сердца 17,5;
Протеаза пептон 2,0;
Декстроза 0,16;
Хлорид натрия 0,39;
Натрия гидрофосфат 2,5;
Натрия полианетолсульфонат 0,25.
Конечное значение рН (при 25°С) 7,4 ± 0,2.
Хранить при температуре +2. 8°C. Использовать до даты, указанной на этикетке.
Срок годности — 1 год с даты изготовления.
Упаковка: 10 стеклянных флаконов в картонной коробке.
Каждая упаковка имеет полиграфическую этикетку с инструкцией по применению на русском языке.
Продукция зарегистрирована в ФСЗ (ОКП 9385).
источник
Общая плотная среда для различных чувствительных патогенных микроорганизмов.
Сердечно-мозговой бульон (Brain Heart Infusion) применяется для трудно культивируемых бактерий (стрептококки, пневмококки, менингококки и т.д.) и также рекомендован для культивирования патогенных грибов.
Добавление 20 МЕ пенициллина и 40 мкг стрептомицина на 1 мл культуральной среды практически полностью подавляет рост нормальной микрофлоры.
Если планируется использовать данную среду для селективного выделения трудно культивируемых грибов (особенно Histoplasma capsulatum и Blastomyces), добавляют 10% стерильной дефибринированной крови, а для образцов со смешанной инфекцией также добавляют 0,05 мкг/мл циклогексимида и 0,5 мкг/мл хлорамфеникола.
Из-за наличия глюкозы эта среда не дает характерных реакций гемолиза даже после добавления крови.
Приготовление
Развести 52 г порошка в 1 л дистиллированной воды и вскипятить. Разлить в соответствующие флаконы или пробиркии стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС.
Среда предназначена только для лабораторного использования. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности Контроль качества
Температура инкубации: 35°C ± 2,0
Время инкубации: 24-48 часов
Инокуляция: 10-100 КОЕ. Метод посева: спиральный (согласно стандарту ISO/TS 11133-1/2)
источник
Жидкие среды зарегистрированы в Федеральной Службе по надзору в сфере здравоохранения и социального развития РФ (регистрационное удостоверение № 2009/04464)
Жидкие питательные среды используют для диагностики микробного заражения крови.
Жидкие питательные среды для кровяных культур представляют собой бульоны, готовые к применению, которые содержат восстановленную основу и специальный компонент – полианетолсульфонат натрия (SPS), предотвращающий свертывание крови, а также нейтрализует бактерицидное действие свежей сыворотки. Для облегчения внесения крови и культивирования микроорганизмов жидкие среды разливаются под вакуумом и наполняются СО2.
Для культивирования строгих аэробных культур рекомендуется вскрывать флакон для введения стерильного воздуха.
Поставляются жидкие среды во флаконах из нейтрального стекла. Флаконы герметично закрыты резиновыми пробками и винтовыми алюминиевыми крышками.
Использование
Засев крови во флакон надо производить после смены иглы шприца и после стерили¬зации пробки флакона. Для этого снять винтовую пробку, а резиновую обработать 70% спиртом и настойкой йода. После подсыхания проколоть пробку иглой шприца и ввести во флакон кровь в со¬отношении 1:10 к среде и надеть винтовую пробку.
Для взрослых предназначены флаконы по 50 и 100 мл, для детей – по 20 мл.
Флаконы необходимо инкубировать в термостате при 35–37°С не менее 7 дней, ежедневно осматривая, для аэробных культур – периодически встряхивая в первые сутки, а оставшиеся 5 дней – однократно.
При наличии видимых признаков роста ежедневно производят микроскопические исследования. После исследования окрашенных мазков по Гамму производят высевы гемокультур на соответствующие селективные среды с последующей идентификацией.
Визуальные признаки роста гемокультур при посевах крови
Макроскопические изменения среды
Стрептококки, стафилококки, листерии, бациллы, клостридии
Аэробные грамотрицательные палочки, стафилококки, бактероиды
Аэробные грамотрицательные палочки, анаэробы
бациллы, псевдомонады, дрожжи
| Название | Фасовка | Назначение | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Настой из мозга теленка и говяжьего сердца | 17,5 г/л |
| Панкреатический перевар желатина | 17,5 г/л |
| Протеаза пептон | 2,0 г/л |
| Натрия гидрофосфат | 2,5 г/л |
| Натрия полианетолсульфонат | 0,25 г/л |
| Натрия хлорид | 0,39 г/л |
| Декстроза | 0,16 г/л |
| Конечное значение рН (при 25°С) | 7,4±0,2 |
Среда разливается по флаконам в количестве 70 мл во флакон для инокуляции цельной крови от 8 до 10 мл, т.е. соотношение кровь:среда составляет 1:7.
Авторы среды характеризуют данную среду, как однофазная готовая среда на основе сердечно-мозгового настоя для эффективного, быстрого и простого получения гемокультур. Сердечно-мозговой бульон богат питательными веществами и хорошо буферизован, полезен для выращивания самых разнообразных микроорганизмов, предпочтителен при культивировании анаэробных бактерий, дрожжей и плесневых грибов. Протеаза пептон, настой из мозга теленка и говяжьего сердца служат в качестве источников углерода, азота, незаменимых факторов роста, аминокислот и витаминов, декстроза — энергии. Динатрийфосфат оказывает буферное действие, тогда как хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Для инактивации бактерицидных свойств крови и обеспечения роста бактерий в качестве нетоксичного антикоагулянта применяется натрия полианетолсульфонат (SPS).
К достоинству данной среды относится то факт, что среда приготовлена на основе сердечно-мозгового настоя, что способствует росту большинству микроорганизмов, требовательных к питательной среде, включая широкий спектр клинически значимых возбудителей кровотока. Применение антикоагулянта способствует росту микроорганизмов. Панкреатические пептоны (протеозопептон) представляют собой смесь продуктов более глубокого гидролиза — простых полипептидов, пептонов и большого количества свободных аминокислот с высоким содержанием аминного азота (до 1200 мг%).
Наряду с этим существуют определенные недостатки у этой среды.
1. Сердечно-мозговой экстракт составляет 1,75% в среде, что не обеспечивает достаточного полноценного состава питательных веществ для роста высоко требовательных микроорганизмов
2. Отсутствует система газозамещения воздуха на инертный газ во флаконе со средой, поэтому среда не пригодна для выделения облигатных (строгих) анаэробных возбудителей из крови и не подходит для адаптационных условий для аэробных и факультативно-анаэробных при переходе из кровеносного русла в искусственную среду, т.е. из условий отсутствия свободного кислорода в условия насыщенного кислородом воздуха. Система дыхания факультативно-анаэробных микроорганизмов, к числу которых относится наибольшее количество клинически значимых микроорганизмов, претерпела изменения за время длительного пребывания в кровотоке и перешла на анаэробный тип дыхания.
3. Отсутствуют ингредиенты для поддержания окислительно-восстановительного потенциала среды (Eh). От уровня окислительно-восстановительного потенциала зависит рост как аэробов, так и анаэробов. У аэробов эта зависимость менее заметна, так как уровень этого фактора в питательной среде без замещения воздуха на инертный газ полностью соответствует уровню, необходимому для их роста. Облигатные анаэробы проявляют повышенную чувствительность к окислительно-восстановительному потенциалу в среде и прекращают размножаться при Eh выше — 0,1В. Создание или поддержание Eh среды на заданном уровне представляет собой более сложную задачу, чем регуляция рН.
Для снижения Eh питательной среды используют несколько приемов.
1. Вытеснение из среды воздуха кипячением или инертными газами — аргоном, азотом, гелием.
2. Добавление к среде органических и неорганических восстановителей (редуцирующих веществ). Из органических восстановителей в основном используются цистеин, аскорбиновая кислота, тиогликолят натрия, L-тирозин, глютатион. Из неорганических восстановителей наиболее широкое применение нашли гидросульфит натрия (Na2S2O4), гексацианоферроат калия K4[Fe(CN)6], различные сульфиды.
Отсутствие ингредиентов для поддержания окислительно-восстановительного потенциала не позволяет расти облигатным анаэробным микроорганизмам.
4. Не выдерживается принятое на практике соотношение количества инокулируемой цельной крови к жидкой питательной среде, как 1:10. В прототипе это соотношение составляет 1:7.
Задачей изобретения является разработка жидкой сердечно-мозговой среды, повышающей стабильность и скорость роста бактерий, позволяющей выявлять аэробные, микроаэрофильные и анаэробные микроорганизмы, относящиеся к клинически значимым возбудителям инфекции кровотока, а также способа ее приготовления.
Технический результат, достигаемый при осуществлении изобретения, заключается в повышении диагностической эффективности получения гемокультуры возбудителя из крови за счет обеспечения высокопитательной среды (сердечно-мозговой экстракт, ростовые факторы), создания анаэробных условий и расширения спектра выделяемых возбудителей (аэробных, микроаэрофильных и анаэробных) из крови. Предлагаемый способ приготовления жидкой питательной среды во флаконах позволяет гарантировать максимальное выделение жизнеспособных микроорганизмов, циркулирующих в кровотоке при патологическом инфекционном состоянии. Получение гемокультуры возбудителя из крови подтверждает диагноз заболевания и обеспечивает назначение целевой антимикробной терапии.
Сущность изобретения заключается в том, что заявляемая среда включает мозговой экстракт крупного рогатого скота, сердечный экстракт крупного рогатого скота, ферментативный гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, натрия хлорид, глюкозу, натрия тиогликолят, L-цистеина гидрохлорид, гемин, менадион, твин-80, агар-агар, дистиллированную воду при следующем соотношении ингредиентов на 1 л среды:
| Мозговой экстракт | 100 мл/л |
| Сердечный экстракт | 150 мл/л |
| Ферментативный гидролизат казеина | 15 г/л |
| Дрожжевой экстракт | 5 г/л |
| Натрия хлорид | 2,5 г/л |
| Глюкоза | 5 г/л |
| Натрия тиогликолят | 0,5 г/л |
| L-цистеина гидрохлорид | 0,75 г/л |
| 1% р-р гемина | 1.0 мл/л |
| 1% р-р менадиона | 1.0 мл/л |
| Твин-80 | 1,0 мл/л |
| Агар-агар | 0,75 г/л |
| Дистиллированная вода | до 1 литра, |
Насыщение среды азотом для создания анаэробных условий.
Среда обогащена инертным газом для создания анаэробных условий и расширения спектра выделяемых возбудителей (аэробных, микроаэрофильных и анаэробных) из крови. Предлагаемая среда проста в изготовлении, стабильна, имеет максимальный набор питательных веществ и пригодна для выделения аэробных, микроаэрофильных и анаэробных возбудителей из крови при диагностике инфекции кровотока. В предлагаемой прописи одновременное использование сердечного и мозгового экстрактов с ферментативным гидролизатом казеина и дрожжевым экстрактом обеспечивает наиболее полное содержание витаминов группы В, соединений азота и углерода, микроэлементов. Питательные среды на основе различных гидролизатов казеина используются в диагностике инфекционных заболеваний.
В качестве источника углерода, азота и других компонентов для многих общеупотребительных и специальных питательных сред используются продукты, получаемые из дрожжей: дрожжевая вода, дрожжевой настой, дрожжевой автолизат, дрожжевой экстракт, кислотные и ферментативные гидролизаты дрожжей. Дрожжи содержат до 53% белка, 25-40% углеводов и являются богатым источником витаминов группы В, витамина Д, и других факторов роста — пуриновых и пиримидиновых оснований. Белок дрожжей сбалансирован по аминокислотному составу и по этому показателю близок к животному белку. Наиболее широко используемым в промышленных масштабах является дрожжевой экстракт. Содержание хлоридов (в пересчете на натрия хлорид) является относительным показателем уровня осмотического давления в среде, соответствия его уровню, необходимому для сохранения жизнедеятельности микроорганизмов. Среда должна быть изотоничной для микробной клетки, т.е. осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки. Для большинства микроорганизмов оптимальная среда соответствует 0,5% раствору натрия хлорида. L-цистеина гидрохлорид представляет собой аминокислоту и в сочетании с полужидкой средой создает анаэробные условия.
Факторы роста или ростовые вещества необходимы для роста и размножения некоторых микроорганизмов, кроме источников углерода, энергии и минеральных элементов. К ним относятся аминокислоты, витамины, пуриновые и пиримидиновые основания. Эти вещества необходимы всем микроорганизмам, однако многие (прототрофы) синтезируют их сами, другие (ауксотрофы) не способны к синтезу одного или нескольких факторов и для обеспечения их роста недостающее соединение должно быть внесено питательную среду. Гемин, менадион, твин-80, тиогликолят натрия являются ростовыми факторами для трудно культивируемых микроорганизмов. Кроме того, тиогликолят натрия снижает окислительно-восстановительный потенциал. Данный редокс-потенциал помогает поддерживать небольшое количество агара в среде.
Существенные отличия предлагаемого технического решения.
1. Возможность использования предлагаемой среды для ускорения получения гемокультуры при диагностике инфекции в кровотоке.
2. Замена дорогостоящей импортной питательной среды более дешевой легкодоступной питательной средой, приготовленной на основе сердечно-мозгового экстракта, что соответствует рецептуре импортных сред.
3. Создание анаэробных условий позволит расширить круг выделяемых возбудителей при инфекции в крови.
4. Применение различных объемов питательной среды дает более широкую возможность использовать ее для детей и взрослых.
5. Разные соотношения инокулируемой крови к питательной среде (от 1:10 до 1:20) способствуют повышению эффективности диагностики инфекции кровотока.
В результате этого достигается
1) увеличение спектра выделяемых микроорганизмов за счет стабильности и скорости роста различных бактерий и грибов;
2) удешевление питательной среды без потери ее питательной ценности.
Способ приготовления заявляемой питательной среды во флаконах включает
1) получение сердечно-мозгового экстракта;
2) получение 1% раствора гемина;
3) получение 1% раствора менадиона;
4) добавление питательных веществ с целью улучшения ростовых свойств среды и разлив питательной среды по флаконам
5) насыщение среды во флаконах инертным газом (азотом) для создания анаэробных условий, способствующих выделению анаэробных микроорганизмов и адаптации аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
1. Приготовление сердечно-мозгового экстракта
Сердце и мозги крупного рогатого скота очистить от пленок, сосудов, оболочек, жира. Измельчить при помощи мясорубки. Залить одинарным количеством водопроводной воды (на 1 кг ткани — 1 л воды). Оставить на ночь в холодильнике при t +4°С. Сердце и мозги обрабатывают и готовят экстракты отдельно.
Настой при помешивании довести до кипения и кипятить 5-10 минут. Горячие экстракты профильтровать вначале через 3 слоя марли и затем через ватно-марлевый фильтр. Разлить по флаконам емкостью: мозговой экстракт по 100 мл и сердечный по 150 мл. Закрыть резиновыми пробками и завальцевать металлическими колпачками. Автоклавировать 15 минут при 0,7 атмосфере. Готовые экстракты хранят при условии холодильника при t +4°C.
2. Приготовление 1% раствора гемина
1 грамм гемина растворяют в 10,0 мл 1N раствора едкого натрия и доводят дистиллированной водой до объема 100 мл. Хранят при t 4°C. Стерилизуют автоклавированием при 1 атм. в течение 15 минут.
3. Приготовление 1% раствора менадиона
1 грамм менадиона растворяют в 100 мл 96% этилового спирта. Хранят в темном флаконе с притертой пробкой при t 4°C.
4. Сухие ингредиенты (ферментативный гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, хлорид натрия, глюкоза, тиогликолят натрия, L-цистеина гидрохлорид, агар-агар) растворить в дистиллированной воде, довести до кипения и кипятить 2-3 минуты. Затем добавить стерильные мозговой и сердечный экстракты, раствор гемина и менадиона. Довести pH до 7,4-7,6 раствором 8N NaOH. Разлить по 50,0 мл по флаконам, закрыть резиновыми пробками.
5. Заместить воздух во флаконах азотом, используя шланг с длинной широкого диаметра иглой, накрыть металлическими колпачками и завальцевать. Автоклавировать при 1 атмосфере в течение 15-20 минут. Хранить при t +4°C.
Осуществление изобретения представлено на следующих примерах.
Сухие ингредиенты: ферментативный гидролизат казеина 15 г, дрожжевой экстракт 5 г, натрия хлорид 2,5 г, глюкоза 5 г, тиогликолят натрия 0,5 г, L-цистеина гидрохлорид 0,75 г, агар-агар 0,75 г растворяют в 750 мл дистиллированной воды, доводят до кипения и кипятят 2-3 минуты. Затем добавляют стерильные растворы: мозговой экстракт крупного рогатого скота 100 мл, сердечный экстракт крупного рогатого скота 150 мл, 1% раствор гемина 1,0 мл, 1% раствор менадиона 1,0 мл, твин-80 1,0 мл. Доводят pH до 7,4-7,6 раствором 8N NaOH. Разливают разные объемы среды (50,0 мл, 100,0 мл и 200,0 мл) по флаконам разной вместимости (50 мл, 150 мл и 250 мл, соответственно). Закрывают флаконы резиновой пробкой. Замещают воздух во флаконах азотом в течение 20 секунд при помощи изогнутой иглы, соединенной со шлангом от газового баллона. Накрывают резиновую пробку алюминиевым колпачком и завальцовывают ручным способом при помощи приспособления ПОК-3, или машинным способом при помощи «Закаточного полуавтомата ПЭР-М». Стерилизуют автоклавированием при 1 атмосфере в течение 15-20 минут. Хранят в условиях холодильника при t 4°C в течение 3-4 месяцев.
Приспособление ПОК-3 для обжима колпачков К-3. Приспособление предназначено для ручного обжима алюминиевых колпачков типа К-3 при укупорке стеклянных флаконов. Производитель: ООО-Медиформ.
Полуавтомат закаточный ПЭР-М предназначен для укупоривания любого типа флаконов с гладким или винтовым горлом емкостью от 10 до 500 мл алюминиевыми колпачками К-1, К-2, К-3, К-4, К-5 для аптечного и фармацевтического производства. Относится к медицинскому оборудованию. По ОКП ОК 005-93 присвоен код 945240 «Оборудование лабораторное и аптечное» и соответствует требованиям GMP к фармацевтическому оборудованию. Производитель: ООО-ВИПС-мед фирма.
Готовая среда имеет темно-соломенную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует. Кислотность среды: при t 25°С водный раствор среды (3,4% вес/объем) имеет рН 7,4±0,2
Были сопоставлены результаты выделения микроорганизмов из крови при инокуляции крови в две различные среды.
Среда №1 — «Двойная среда», регламентированная Приказом №535 от 1985 года. Объем питательной среды во флаконе — 100,0 мл. Объем инокулируемой крови — 10,0 мл. Соотношение кровь:среда 1:10.
Среда №2 — Заявленная среда. Объем питательной среды во флаконе -100,0 мл. Объем инокулируемой крови — 10,0 мл. Соотношение кровь:среда 1:10.
Исследование проводилось на пробах крови терапевтических пациентов кардиологического профиля с диагнозами: инфекционный эндокардит, ревматизм, врожденный порок сердца, ишемическая болезнь сердца и лихорадочное состояние. Пробы крови забирались при венопункции с соблюдением правил асептики.
Среда №1 была разлита по флаконам и закрыта ватно-марлевыми пробками. Среда, приготовленная таким способом, потенциально обеспечивает рост только аэробных и минимального количества микроаэрофильных микроорганизмов.
Среда №2 была также разлита по флаконам, насыщена азотом, закрыта резиновой пробкой и завальцована алюминиевым колпачком. Данная среда способна была обеспечить рост аэробных, микроаэрофильных и анаэробных микроорганизмов в полном объеме.
Всего было исследовано 260 проб крови.
При посеве на среду №1 получено 35 гемокультур, что составило 13,5% случаев лабораторной эффективности. На среде №2 получили 106 гемокультур, что составило 40,6% случаев эффективности выделения возбудителя из крови, что в 3 раза превышает показания эффективности среды №1. Необходимо отметить, что аэробные и микроаэрофильные микроорганизмы в большинстве случаев были получены при культивировании в анаэробных условиях (56,3% и 47,2%, соответственно). Анаэробные условия культивирования крови значительно повысили диагностическую эффективность при исследовании крови.
Разработанная нами жидкая сердечно-мозговая среда является оптимальной средой для микробиологического исследования крови при инфекции в кровотоке, так как она способна обеспечить рост аэробных, микроаэрофильных и анаэробных возбудителей, включая высоко требовательные к питанию микроорганизмы. Объем среды во флаконе в количестве 50,0 мл является минимальным, так как рассчитан на посев 5,0 мл цельной крови для соблюдения оптимального соотношения крови к среде как 1:10. Минимальный объем пробы крови (5,0 мл), взятый у больного, относится к щадящей технике взятия пробы крови для исследования.
Мы сравнили результаты выделения микроорганизмов из крови при инокуляции исследуемых образцов крови в две различные среды: прототип и заявляемая.
Среда №1 — прототип. Система однофазная для гемокультур (бульон) с сердечно-мозговой вытяжкой для аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (ФСЗ 2009/03708), (HiMedia Laboratories), Индия. Объем питательной среды во флаконе — 70 мл. Объем инокулированной крови — 10 мл. Соотношение кровь:среда 1:7.
Среда №2 — «Жидкая сердечно-мозговая среда» нашего приготовления. Объем питательной среды во флаконе — 100,0 мл. Объем инокулируемой крови — 10,0 мл. Соотношение кровь:среда 1:10.
Для исследования отбирали кровь терапевтических больных кардиологического профиля с разными кардиологическими заболеваниями: инфекционный эндокардит, ревматизм и лихорадочное состояние.
Среда №1 — разлита по флаконам, закрыта герметично резиновыми пробками и завальцована колпачком. Данная среда предназначена для выращивания аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов и не предусматривает рост строгих анаэробов в виду отсутствия газозамещения для создания анаэробных газовых условий.
Среда №2 — также разлита по флаконам, герметично закрыта резиновой пробкой и завальцована колпачком, но предварительно было проведено газозамещение для насыщения среды и пространства над средой азотом для обеспечения роста аэробных, факультативно-анаэробных, микроаэрофильных и строгих анаэробных микроорганизмов.
Всего было параллельно исследовано 150 проб крови.
При культивировании крови на среде №1 было получено 47 штаммов микроорганизмов, что составило 31,3% диагностической эффективности. Одновременно при посеве на среду №2 было выделено 82 штамма микроорганизмов, что соответствовало 54,7% диагностики инфекции в крови. Лабораторная эффективность общего выделения микроорганизмов из крови среды №2 превысила результаты на среде прототипа в 1,7 раза.
Отмечается повышенная эффективность по выделению аэробных (в 1,4 раза) и микроаэрофильных (в 2,1 раза) микроорганизмов на среде №2 по отношению к среде №1. Строгие анаэробы были получены только на среде №2. Дополнительно была повышена эффективность на 9,8% случаев.
1. Приказ МЗ СССР №535 от 22.04.1985 г. приложение 1 к приказу «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений, Москва, стр. 5-10.
2. Bouza Е., Perez-Molina J., Munoz P. Report of ESGNI-001 and ESGNI-002 studies. Bloodstream infections in Europe. Clin. Microbiol. Infect, 1999, 5, 2S1-2S12.
3. Washington JA., 2nd Blood cultures: Principles and techniques. Mayo Clin Proc. 1975; 50:91-8.
4. D. Elantamilan, Valarie Wihiwot Lyngdoh, Annie B. Khyriem, Jyotismita Rajbongshi, Ishani Bora, Surbala Thingujam Devi, Prithwis Bhattacharyya, and Himesh Barman Comparative evaluation of the role of single and multiple blood specimens in the outcome of blood cultures using BacT/ALERT 3D (automated) blood culture system in a tertiary care hospital, Indian J. Crit. Care. Med., 2016, 20 (9), 530-533.
5. Lee D.H., Kim S.C., Bae I.G., Koh, E.H., Kim. S. Клиническая оценка флаконов ВасТ/ALERT FA Plus и FN Plus в сравнении со стандартными флаконами, J. of Clinic. Microb., 2013, 51 (12), 4150-4155.
6. Багирова Н.С. Диагностика бактериемии, Consilium Medicum, 2002, т. 4 (1).
7. Cockerill F.R., Wilson J.W., Vetter T.A., Optimal testing parameters for blood cultures, Clin. Infec. Dis., vol.38, 12, p. 1724-30.
1. Сердечно-мозговая питательная среда для диагностики инфекции в кровотоке, содержащая мозговой экстракт крупного рогатого скота, сердечный экстракт крупного рогатого скота, ферментативный гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, натрия хлорид, глюкозу, натрия тиогликолят, L-цистеина гидрохлорид, гемин, менадион, твин-80, агар-агар, дистиллированную воду при следующем соотношении ингредиентов на 1 л среды:
| Мозговой экстракт | 100 мл/л |
| Сердечный экстракт | 150 мл/л |
| Ферментативный гидролизат казеина | 15 г/л |
| Дрожжевой экстракт | 5 г/л |
| Натрия хлорид | 2,5 г/л |
| Глюкоза | 5 г/л |
| Натрия тиогликолят | 0,5 г/л |
| L-цистеина гидрохлорид | 0,75 г/л |
| 1% р-р гемина | 1.0 мл/л |
| 1% р-р менадиона | 1.0 мл/л |
| Твин-80 | 1,0 мл/л |
| Агар-агар | 0,75 г/л |
| Дистиллированная вода | до 1 литра |
2. Питательная среда по п. 1, отличающаяся тем, что она насыщена азотом.
3. Способ приготовления сердечно-мозговой питательной среды по п. 1, предусматривающий растворение 15 г ферментативного гидролизата казеина, 5 г дрожжевого экстракта, 2,5 г натрия хлорида, 5 г глюкозы, 0,5 г тиогликолята натрия, 0,75 г L-цистеина гидрохлорида, 0,75 г агар-агара в 750 мл дистиллированной воды, доведение полученного раствора до кипения и кипячение в течение 2-3 мин, добавление стерильных растворов мозгового экстракта крупного рогатого скота в количестве 100 мл, сердечного экстракта крупного рогатого скота в количестве 150 мл, 1,0 мл 1% раствора гемина, 1,0 мл 1% раствора менадиона и 1,0 мл твин-80; доведение pH до 7,4-7,6, розлив среды по флаконам и их закупоривание резиновой пробкой, последующее замещение воздуха во флаконах азотом в течение 20 секунд при помощи изогнутой иглы, соединенной со шлангом от газового баллона, окончательное закупоривание флакона алюминиевым колпачком и завальцовывание.
источник