Меню

Агар левина с метиленовым синим и эозином

Levine EMB (Agar Eosin Methylene-blue Lactose agar acc. to Levine) Агар Левина (Агар с эозином и метиленовым синим по Левину)

Кат. N 1.01342.0500

Для выделения и дифференциации Е. coli и энтеробактерий и для быстрого определения Candida albicans , разработана Levine (1918, 1921).

Согласовано с рекомендациями АР H А по исследованию воды и сточных вод (1998) и USP XXIII (1995).

Принцип действия

Красители, содержащиеся в этой среде, подавляют рост многих сопутствующих грамположительных бактерий. По мнению Weld (1952,1953), Vogel и Moses (1957) агар Левина может быть использован для определения Candida albicans в клинических материалах, если добавить в него тетрациклин-гидрохлорида для подавления остальной микрофлоры. Агар Левина также пригоден для определения коагулазоположительных стафилококков, которые образуют характерные точечные колонии. Характер роста коагулазоположительных стафилококков на агаре коррелирует с результатами анализа колоний на коагулазу.

Пептон 10,0; лактоза 10,0; калий фосфорнокислый двузамещенный 2,0; азур-эозин 0,4; метиленовый синий 0,065; агар-агар 13,5.

Приготовление

Растворить 36 г/л воды, автоклавировать 15 мин при 121°С, разлить в чашки.

Чашки прозрачные, красно-коричневые.

При культивировании Candida необходимо добавить 100 мг тетрациклина гидрохлорид на 1 л среды после автоклавирования и тщательно перемешать.

Питательная среда в этом случае становится синей.

Проведение анализа

Исследуемый материал распределяют тонко по поверхности среды в чашках.

Инкубация 1-2 дня при 35°С аэробно. Для получения первичных колоний Candida посев необходимо инкубировать на среде с тетрациклин-гидрохлоридом в атмосфере 10% CO 2 т.е. в Anaerocult ® С или Anaerocult ® С мини).

Диаметр 2-3 мм, зеленый металлический блеск в отраженном свете, темный или очень темный центр в проходящем свете

Диаметр 4-6 мм, серо-коричневый центр в проходящем свете без металлического блеска

Бесцветные, точечные колонии

Дрожжеподобные, круглые, гладкие

Другие виды Candida , иногда Nocardia

хороший / очень хороший

Металлический оттенок

Escherichia coli ATCC 25922

хороший / очень хороший

Escherichia coli ATCC 11775

хороший / очень хороший

Escherichia coli 194

хороший / очень хороший

Enterobacte r cloacae ATCC 13047

хороший / очень хороший

бледно-голубой

Shigella sonnei ATCC 11060

хороший / очень хороший

Salmonella typhimurium ATCC 14028

хороший / очень хороший

Proteus mirabilis ATCC 14273

хороший / очень хороший

Staphylococcus aureus ATCC 2 5923

источник

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Вид упаковки: полиэтиленовая банка

Питательная среда Левина-ГРМ с эозинметиленовым синим для выделения патогенных и условно патогенных энтеробактерий из исследуемого материала, их дифференциация по признаку ферментации лактозы. На среде так же можно выделить коагулазоположительных стафилококков. Эозин и метиленовый синий придают селективные свойства. В виде сухого порошка, фасовки 250 гр достаточно для приготовления 6,6 л плотной агаровой среды

Дифференциально-диагностическая селективная среда, принцип действия основан на способности некоторых бактерий к ферментации лактозы с образованием продуктов, смещающих рН в кислую сторону, и как следствие изменение цвета комплекса индикаторов, окрашивающих колонии кислотообразующих бактерий в темно-фиолетовый цвет. В результате культивирования получается четкая дифференциация в виде изолированных единичных колоний: лактозоотрицательные образуют прозрачные или полупрозрачные бесцветные колонии с возможной незначительной пигментацией, например, Staphylococcus aureus, Shigella flexneri. Лактозоположительные энтеробактерии формируют непрозрачные от светло-сиреневого до фиолетового цвета с зеленоватым металлическим блеском или без него, в частности у E. coli

Состав среды: панкреатический гидролизат рыбной муки, дрожжевой экстракт, лактоза, натрий фосфорнокислый двузамещенный, натрий хлористый, эозин-Н, метиленовый синий, агар.
В виде гомогенного сухого, легко растворимого порошка светло-сиреневого цвета.
Готовая среда прозрачная, от светло-сиреневого до красновато-коричневого цвета.
Кислотность среды: при 25°С имеет рН 7,2 ± 0,2.
Готовую среду можно использовать в течение первых трех дней при температуре хранения +2. 8°C в темном месте.
Форма выпуска: сухой порошок в полиэтиленовых банках по 250 г.
Условия хранения: в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре +2. 30°C.
Срок годности — 2 года с даты производства, указанной на упаковке.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2008/03063

Вся представленная на сайте информация, касающаяся технических характеристик, наличия на складе, стоимости товаров, носит ознакомительный характер и ни при каких условиях не является публичной офертой, определяемой положением пунктом 2 статьи 437 Гражданского кодекса Российской Федерации. Всю подробную информацию о товарах, их наличии и стоимости Вы можете получить у менеджеров отдела клиентского сервиса.

На данном сайте используются файлы cookie (куки) в целях совершенствования работы сайта и получения аналитической информации. В случае несогласия, просим произвести соответствующие настройки в браузере или покинуть данный сайт. Оставаясь на www.art-medika.com, Вы принимаете нашу политику конфиденциальности. Заполняя форму заявки, Вы подтверждаете свое согласие на обработку персональных данных.

© 2012-2019 Арт-Медика оборудование, реагенты, изделия медицинского назначения для клинической лабораторной диагностики

источник

Агар Левина с метиленовым синим и эозином – слабо-селективная среда для исследования и дифференциации энтеробактерий, ферментирующих и неферментирующих лактозу, из молочных и других пищевых продуктов и клинических образцов. Она также используется для анализа материалов с повышенными санитарно-гигиеническими требованиями на наличие колиформ.

Желатиновый пептон является источником питательных веществ, необходимых для роста микроорганизмов: азота, витаминов, минеральных солей и аминокислот. Лактоза – ферментируемый углевод, источник углерода и энергии. Эозин и метиленовый синий – ингибиторы грамположительных бактерий. Колиформы, лактозо-ферментирующие организмы, идентифицируются как колонии сине-черного цвета. Колонии Salmonella spp. и Shigella spp., неферментирующих лактозу, – бесцветные, прозрачные или янтарные.

Среда также используется для выделения и идентификации Candida albicans. Инокулировать пробу и инкубировать 18–48 часов при 35±2°C, далее см. таблицу с морфологическими характеристиками колоний.

Исследуемый клинический материал (слюна, мокрота, выделения из дыхательных путей или вагинальные, соскобы с кожи и ногтей) засевается штрихом на поверхность агара с добавлением тетрациклина. Через 24–48 часов инкубации при 35°C в атмосфере, содержащей приблизительно 10% CO2, появляются колонии Candida albicans − на вид перистые или похожие на «паутину». Так как метод не всегда дает одинаковые результаты, одновременно следует проводить проверку на образование хламидоспор на специальных средах, таких как Агар BIGGY (кат. № 1006), а также выполнять экспресс-тесты на ферментацию сахаров.

Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах после инкубации при температуре 35±2°C и наблюдались через 24–48 часов.

источник

Левина-ГРМ Оболенск Питательная среда с эозин-метиленовым синим для выделения и дифференциации патогенных и условно патогенных энтеробактерий, а также для выделения стафилококков, сухая.

ИНСТРУКЦИЯ по применению питательной среды с эозин-метиленовым синим сухой — Среда Левина-ГРМ Оболенск

Среда Левина-ГРМ Оболенск предназначена для бактериологических исследований в санитарной и клинической микробиологии с целью выделения и дифференциации патогенных и условно патогенных энтеробактерий, а также для выделения стафилококков.

  1. характеристика

Среда Левина-ГРМ Оболенск представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный порошок светло-сиреневого цвета.

Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.

2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

Наличие в среде эозина и метиленового синего придают ей селективные свойства.

Дифференцирующая способность среды основана на изменении рН среды под действием кислоты, образующейся при ферментации бактериями лактозы. Комплекс индикаторов в кислой зоне окрашивает колонии кислотообразующих бактерий в темно-фиолетовый цвет, некоторые колонии имеют зеленоватый металлический блеск.

Среда Левина-ГРМ Оболенск представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:

Панкреатический гидролизат рыбной муки …………. 12,0
Дрожжевой экстракт ………………………………….. 1,0
a-Д-лактоза, 1-водная ………………………………… 10,0
Натрия гидрофосфат ………………………………….. 0,7
Натрия хлорид ………………………………………… 4,2
Эозин-Н ……………………………………………….. 0,4
Метиленовый синий ………………………………….. 0,065
Агар микробиологический …………………………… 9,0±3,0
  1. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Среда Левина-ГРМ должна обеспечивать на всех засеянных чашках Петри рост тест-штаммов Shigella flexneri 1a 8516 и Escherichia coli 168/59 (O111:K58) через 18-20 ч инкубации при температуре (37±1) °С при посеве по 0,1 мл микробной взвеси культуры каждого тест-штамма из разведения 10 -7 , и рост тест-штамма Staphylococcus aureus 209-P (АТСС 6538-Р) через 48 ч инкубации при температуре (37±1) °С при посеве по 0,1 мл микробной взвеси культуры тест-штамма из разведения 10 -5 .

Дифференцирующие свойства среды. Питательная среда должна обеспечивать чёткую дифференциацию шигелл от эшерихий на всех засеянных чашках при посеве по 0,1 мл микробной смеси S. flexneri 1a 8516 и E. coli 168/59 (O111:K58) из разведения 10 -6 (в соотношении 1:1) через 18- 20 ч инкубации при температуре (37±1) °С.

  1. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Потенциальный риск применения питательной среды в соответствии с Приказом
МЗ РФ №4н от 06.6.2012 — класс 2 а.

При анализе исследуемого материала необходимо соблюдение СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV группы патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

  1. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
  • Термостат обеспечивающий температуру 37±1 °С
  • Весы лабораторные 2 класса точности
  • Автоклав
  • Пробирки стеклянные
  • Пипетки стеклянные позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
  • Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
  • Чашки Петри стерильные
  • Вода дистиллированная
  • Колбы
  • Воронки стеклянные
  1. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Объекты исследований в клинической лабораторной диагностике (кровь, желчь, моча, гной и т.д.).

  1. Проведение АНАЛИЗа

Исследование проводят в условиях бактериологической лаборатории медицинскими специалистами.

7.1. Приготовление среды Левина-ГРМ Оболенск.

Порошок в количестве, указанном на этикетке для приготовления конкретной серии питательной среды, размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят в течение 3 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют автоклавированием при температуре 110 °С в течение 20 мин. Стерильную среду охлаждают до температуры
45-50 °С, разливают в стерильные чашки Петри слоем 5-6 мм. После застывания среды чашки подсушивают при температуре (37±1)°С в течение 40-60 мин. Готовая среда в чашках Петри прозрачная, от светло-сиреневого до красновато-коричневого цвета.

Стерильную среду можно использовать в течение 3-х дней при условии ее хранения при температуре 2-8 C.

7.2. Взятие, посев инфицированного материала и учет результатов производят в соответствии с “Методическими указаниями по микробиологической диагностике заболеваний, вызванных энтеробактериями” (М., 1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 г., № 535 “Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений”.

7.3. Исследуемый материал стерильным шпателем тщательно втирают по всей поверхности среды. Инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 46-48 ч.

  1. РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Через 18-20 ч инкубации при температуре (37±1) °С визуально учитывают характер роста культур S. flexneri 1a 8516 и E.coli 168/59 (O111:K58) и через 46-48 ч характер роста культуры S.aureus 209-P (АТСС 6538-Р).

Колонии S.flexneri 1a 8516 должны быть круглыми, прозрачными, бесцветными или слабо-розовыми, диаметром 1,0-1,5 мм.

Колонии E.coli 168/59 (O111:K58) должны быть круглыми, темно-фиолетового цвета с зеленым металлическим блеском (возможно наличие отдельных колоний без металлического блеска), диаметром 1,5-2,0 мм.

Колонии S. aureus 209-P (АТСС 6538-Р) должны быть круглыми, бесцветными или светло-фиолетовыми с темным центром, диаметром до 1,0 мм.

Утилизация серий среды Левина-ГРМ Оболенск с истекшим сроком годности производится по
СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские отходы, принадлежащие к классу «А» — эпидемиологически безопасные отходы.

Уничтожение среды Левина-ГРМ после проведения биологического контроля осуществляется по СанПиН 2.1.7.2790-10 как медицинские отходы, принадлежащие к классу «Б» с обязательным предварительным обезвреживанием путем автоклавирования в течение 2 ч при температуре (133±1) ˚С.

Обращение с медицинскими отходами следует выполнять согласно схеме, принятой в конкретной организации, осуществляющей медицинскую и (или) фармацевтическую деятельность. Данная схема разрабатывается в соответствии с требованиями вышеуказанных санитарных правил и утверждается руководителем организации.

  1. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ

Среду Левина-ГРМ необходимо хранить в герметично закрытой упаковке при температуре от 2 до 30 С и относительной влажности не более 60 %.

Срок годности: 2 года. Среда с истекшим сроком годности использованию не подлежит.

Изготовитель гарантирует соответствие среды Левина-ГРМ заявленным в
ТУ 9398-054-78095326-2008 требованиям и функциональным характеристикам с начала использования в течение всего срока годности и при соблюдении условий хранения и транспортирования.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

По вопросам, касающимся качества среды Левина-ГРМ в течение срока годности следует обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279 Оболенск, Московская обл., Серпуховский р-н, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», тел. (4967) 36-00-20, факс 36-01-16.

источник

Эту среду рекомендуют для выделения, подсчета и дифференциации грамотрицательных микроорганизмов кишечной группы.

EMB Agar, Levine (M022)
Рост Escherichia coli

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Размешать 37,5 г порошка М022 или 27,5 г порошка М301 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Добавить соответствующий углевод к Основе агара Левина (М301) перед стерилизацией. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ. Остудить до 50°С и встряхнуть для окисления метиленового синего (чтобы восстановить его синий цвет и размешать хлопьевидный преципитат). Если среда используется в тот же день, ее можно не автоклавировать.

Предупреждение: среду надо хранить в темноте, чтобы не допустить ее окисления на свету.

Эта среда разработана Levine (1, 2) и используется для дифференциации Escherichia coli и Enterobacter aerogenes, а также для быстрой идентификации грибов Candida albicans. Американские специалисты рекомендуют эту среду для выделения, подсчета и дифференциации грамотрицательных микроорганизмов кишечной (колиформной) группы (3, 4, 5).

Метиленовый синий и эозин в определенной степени подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Данные красители служат в качестве дифференцирующими индикаторами ферментации лактозы. На этой среде могут вырастать в виде точечных колоний дрожжи и некоторые грамположительные бактерии, например, энтерококки. Weld (6, 7) предложил использовать агар Левина с добавлением хлортетрациклина гидрохлорида для быстрой идентификации грибов Candida albicans в клиническом материале. Обнаружение этих грибов в таком материале, как фекалии, оральный и вагинальный секрет, ногти, чешуйки кожи и другом возможно через 24-48 ч инкубирования при 35-37°С в атмосфере, содержащей 10% углекислого газа. Однако культуральные свойства грибов при этом варьируют.

Гомогенный сыпучий светло-лиловый порошок.

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Готовая среда имеет красновато-лиловую окраску, опалесцирует с зеленоватым оттенком и легким преципитатом, если в чашках Петри формируется гель.

При 25°С водный раствор М022 (3,75% вес/об) имеет рН 7,1 ± 0,2, водный раствор М301 (2,75% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2.

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35-37°С.

источник

Цена за упаковку 250 г.

Инструкция по применению набора реагентов «Питательная среда с эозин-метиленовым синим сухая (среда Левина)»

Набор реагентов «Питательная среда с эозин-метиленовым синим сухая (среда Левина)» предназначен для выделения энтеробактерий из исследуемого материала и их дифференциации по признаку ферментации лактозы, выделение коагулазоположительных стафилококков при обследовании декретированных групп.

  1. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

Принцип метода – визуальное обнаружение энтеробактерий, выросших на питательной среде Левина при посеве исследуемых образцов.

Набор реагентов «Питательная среда с эозин-метиленовым синим сухая (среда Левина)» представляет собой смесь сухих компонентов из расчета г/л:

Питательный агар сухой -36,28

Сода кальцинированная -0,064

Набор реагентов «Питательная среда с эозин-метиленовым синим сухая (среда Левина)» выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г,

  1. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

3.1. Чувствительность среды, скорость роста и стабильность основных биологических свойств микроорганизмов. Набор реагентов «Питательная среда с эозин-метиленовым синим сухая (среда Левина)» должен обеспечивать на всех засеянных чашках рост тест-штаммов Shigella flexneri la 8516 и Escherichia coli 168/59 (O111:K58) при посеве по 0,1 мл микробной взвеси из разведений 10 -7 и 10 -6 через 18-20 ч инкубации и тест-штамма Staphylococcus aureus 209-P при посеве по 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10 -5 не позднее 72 ч инкубации при температуре (37±1) °С.

Колонии S.flexneri 1а 8516 должны быть бесцветными прозрачными круглыми диаметром 1,0-2,0 мм. Колонии Е.coli 168/59 (О111:К58) – темно-фиолетовые с металлическим блеском (возможна слабая выраженность металлического блеска) диаметром 1,5-2,5 мм. Колонии S.aureus 209-Р – круглые, бесцветные или розоватого цвета диаметром до 1 мм.

3.2. Дифференцирующие свойства среды. Питательная среда Левина должна обеспечивать четкую дифференциацию по цвету колоний тест-штамма S. flexneri la 8516 от E. coli 168/59 (O111:K58) при посеве по 0,1 мл микробной смеси указанных тест-штаммов из разведения 10 -6 через 18-20 ч инкубации при температуре (37±1) °С.

  1. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Соблюдение «Правил устройства, техники безопасности производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения» (Москва, 1981 г.).

  1. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
  • Термостат, обеспечивающий температуру (37±1) °С;
  • Автоклав;
  • Пробирки стеклянные (ГОСТ 25336-82);
  • Чашки Петри (ГОСТ 23932-90);
  • Вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72);
  • Спиртовка (ГОСТ 25336-82);
  • 0,9 % раствор натрия хлорида (ГОСТ 4233-77);
  • Пипетки (ГОСТ 29227-91);
  • Воронка (ГОСТ 25336-82);
  • Вата медицинская гигроскопическая (ГОСТ 5556-81)
  1. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Объекты исследований в санитарной и клинической микробиологии.

  1. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

7.1. Подготовка питательной среды для использования.

50 г среды Левина размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят 3 мин до полного расплавления агара, фильтруют через ватный фильтр разливают в стерильные бутылки и стерилизуют автоклавированием в течение 20 мин при температуре 112 °С. Среду после стерилизации охлаждают до температуры 45-50 о С, разливают по 20 мл в стерильные чашки Петри слоем 3-4 мм.

После застывания среды, соблюдая правила асептики, чашки подсушивают в течение 40-60 мин при температуре (37±1) °С. Готовая среда может быть использована в течение 7 сут при условии хранения при температуре 2-8 °С.

7.2. Посев исследуемого материала проводить согласно «Методическим указаниям по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» (М.,1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследований, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».

  1. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Регистрацию результатов анализа проводят визуально, по наличию роста колоний.

  1. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Учет результатов производят согласно «Методическим указаниям по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» (М., 1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследований, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».

  1. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА.

Набор реагентов «Питательная среда с эозин-метиленовым синим сухая (среда Левина)» необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом, защищенном от света месте при температуре от 2 до 25 ºС.

Транспортирование должно проводиться при температуре от 2 до 25 ºС всеми видами крытого транспорта.

Срок годности – 3 года со дня изготовления. Набор реагентов с истекшим сроком годности использованию не подлежит.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей Инструкции по применению.

Рекламации на препарата в течение срока годности направлять в адрес производителя: ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России: Россия, 115088, г. Москва, ул. 1-я Дубровская, д.15, тел.(495) 710-37-87. Адрес производства: Россия, 367010, Республика Дагестан, г. Махачкала, ул.А.Султана , 13 б тел. 8722 55 82 32

источник

Ориентировочная карта основ действий

Практического занятия № 7.

Тема: «Основы приготовления простых и сложных питательных сред»

1. Требования, предъявляемые к питательным средам.

2. Основы приготовления питательных сред.

3. Классификация сред и этапы их приготовления.

4. Приготовление простых сред: МПА, МПБ, полужидкого агара, бульона и агара Хоттингера.

5. Приготовление сложных питательных сред:

— дифференциально-диагностических сред для культивирования энтеробактерий

6. Режимы стерилизации различных сред и контроль качества готовых сред

Самостоятельная работа:

Задание № 1.Ознакомьтесь с инструкцией для проведения практического занятия.

Задание № 2.Изучите требования, предъявляемые к питательным средам.

Основные требования:

1. Питательность —способность содержать основные органогены: С, N, O2, K, Ca, Mq, Cu, Fe;микроэлементы: Mn, Mo, Zn, CI, Na, Ni и др.

2. Достаточная влажность— не менее 20% воды.

3.Изотоничность (концентрация солей в микробной клетке должна соответствовать концентрации солей в среде).Для большинства микроорганизмов — 0,5%.

4.Оптимальная рН. Диапазон 4,5-8,5. Для большинства патогенных микробов=7,2-7,4.

5. Определенный окислительно — восстановительный потенциал. Еh для анаэробов=0,120-0,060 В, для аэробов= более 0,080 В.

Стерильность.

7.Унифицированность — содержание постоянных количеств определенных веществ: аминного азота 0,8- 1,2 г/л, полипептидов , общего азота-2,5-3,0 г/л, хлоридов-0,5%

Задание № 3. Изучите классификацию сред.

Классификация сред

Исходное сырьё Разновидности Примеры питательных сред
По исходным компонентам а) натуральные (готовят из продуктов животного и растительного происхождения) б) синтетические (состоят из химических соединений). МПБ, МПА, кровяной агар Эндо, Левина, Плоскирева
По консистенции а) жидкие б) плотные Селенитовый бульон Свёрнутая сыворотка крови, яйца
По составу а) простые б) сложные МПБ, МПА, агар Хоттингера Прибавляют к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и т. д.
По назначению а) основные (служат для культивирования большинства патогенных микробов) б) специальные (для выделения микробов, не растущих на простых средах) в) элективные (благоприятствуют росту одного микроба, но подавляют рост сопутствующих микроорганизмов). Могут выполнять роль, накопительных сред. г) дифференциально-диагностические (позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности) д) консервирующие (предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала) МПА, МПБ, пептонная вода Для культивирования стрептококка к среде прибавляют сахар, пневмо- и менонго- кокков — кровь, возбудителей коклюша — кровь. Жёлтые кислоты подавляют рост кишечной палочки, но благоприятны для роста возбудителя брюшного тифа. Глицериновая смесь.

Задание №4. Изучите этапы приготовления питательных сред.

Основные этапы приготовления питательных сред:

1. Изучение инструкции по приготовлению питательной среды.

2. Взятие навески питательной среды и нужного объема дистиллированной воды.

Задание №5. Изучите рецепты приготовления основных сред:

Мясо-пептонный агар (МПА)

38г. порошка размешать в 1 л. дистиллированной воды, довести до кипения, кипятить до полного расплавления агара (1 – 2 мин.). Разлить в стерильные флаконы и стерилизовать автоклавированием в течении 20 мин. при 121°C ( 1 атм.). Перед разливом в чашки Петри среду охладить до 50°C, разливать слоем 4-6 мм. после застывания среды чашки подсушить в термостате при 37°C.

Мясо-пептонный бульон (МПБ)

15г. порошка тщательно размешать в 1 л. холодной дистиллированной воды. Прокипятить 1-2 мин. Не допуская пригорания. Разлить в пробирки и флаконы. Стерилизовать при 120°C 20 мин.

Полужидкий агар

3,8 г. порошка размешать в 1л. дистиллированной воды, довести до кипения, кипятить до полного расплавления агара (1 – 2 мин.). Разлить в стерильные флаконы или пробирки стерилизовать автоклавированием в течении 20 мин. при 121°C (1 атм.). Среду охладить до 50°C, разлить в пробирки по 5 мл.

Бульон Хоттингера.

Перевар Хоттингера разводят водой в 5-6 раз в зависимости от того, какое количество аминного азота онсодержит и какое его количество должно быть в бульоне (указано в паспорте перевара и рецепте среды).

Например, для приготовления среды с 1,2 г/л аминного азота перевар, содержащий 9,0 г/л, надо развести в 7,5 раз (9,0:1,2).

К разведенному перевару прибавляют 0,5% натрия хлорида и кипятят на слабом огне до растворения соли.

В остывшей среде устанавливают рН, фильтруют, разливают и стерилизуют 20 мин при 120 °С.

Агар Хоттингера.

К 1 литру бульона Хоттингера прибавляют 15-25 г. (1,5-2,5%) мелко нарезанного агар-агара. Кипятят, перемешивая, до полного разведения агара. Устанавливают pH — 7,4-7,6. Фильтруют, разливают в колбы или пробирки, стерилизуют при 120 0 С в течение 20 мин.

Задание №6. Приготовьте питательные среды согласно инструкции.

Задание №7. Изучите рецепты приготовления сложных питательных сред.

Кровяной агар

Расплавить 100 мл. 2% мясопептонного стерильного агара, охладить его до 45°C (не выше!) и прибавить 5 -10 % дефибринированной стерильно взятой крови лошади, кролика или барана. Добавление крови производить, соблюдая правила стерильности. Готовую среду разлить в стерильные чашки Петри (предварительно нагретые в термостате). Дать среде застыть и подсушить в термостате.

Слой агара должен быть равномерно окрашен в красный цвет.

Сывороточный агар

Расплавить 100 мл. 2% мясопептонного стерильного агара, охладить его до 45°C (не выше!) и прибавить 15-20% лошадиной или бычьей сыворотки. Добавление сыворотки производить, соблюдая правила стерильности. Тщательно перемешать, избегая образования пены. Разлить в стерильные чашки Петри. Дать среде застыть и подсушить в термостате.

Среды Гисса.

1,5 г. порошка тщательно размешать в колбе с 100 мл. холодной дистиллированной воды, прокипятить 1-2мин., не допуская пригорания, разлить в пробирки по 3-4 мл. Стерилизовать 20 мин. при 110°C (0, 5 атм.) или дробным методом.

3,7 4 г. среды размешать в 100 мл. дистиллированной воды, кипятить 2-3 мин. до полного расплавления агара, фильтровать через ватно-марлевый фильтр, снова довести до кипения, охладить до температуры 45-50 °C и разлить в стерильные чашки Петри слоем 5-6 мм. После застывания среды чашки подсушить при температуре 37 °C в течении 40-60 мин. Готовую питательную среду необходимо использовать в день приготовления.

Среда Плоскирева

6,2 г. среды тщательно размешать в 100 мл. дистиллированной воды, кипятить 2- 3 мин., периодически помешивая, до полного расплавления агара. Охладить до температуры 45-50°C и разлить в нестерильные чашки Петри слоем 5-6 мм. и оставить для застывания. Перед посевом чашки со средой подсушить на рабочем столе с открытыми крышками в течении 90-100 мин. при температуре 18 – 25 °C.

Среда с эозин – метиленовым синим (среда Левина)-ЭМС.

3,64 г. среды тщательно размешать в 100 мл. дистиллированной воды, кипятить 2-3 мин. до полного расплавления агара, фильтровать через ватно-марлевый фильтр и автоклавировать при температуре 110°C в течении 20 мин. Стерильную среду охладить до температуры 45 — 50°C и разлить в стерильные чашки Петри слоем 5-6 мм. После застывания среды чашки подсушить при температуре 37 °C в течении 40 – 60 минут.

источник

Агар Левина с метиленовым синим и эозином для выделения и дифференцировки энтеробактерий из клинических образцов

37,5 грамм среды в одном литре дистиллированной воды. Хорошо перемешать и раствориться путем нагревания с частым перемешиванием. Кипятите в течение одной минуты до полного растворения. Стерилизуйте в автоклаве при 121ºC в течение 15 минут. Охладите до 45-50 ° С, хорошо перемешайте и опустите в пластинки.

  • Желатин Пептон 10
  • Лактоза 10
  • Фосфат дикалия 2
  • Eosin Y 0.4
  • Метиленовый синий 0,065
  • Бактериологический агар 15

ООО “Пущинские Лаборатории” осуществляет доставку любого из представленных на сайте товаров, а так же товаров из каталогов фирм-производителей отображенных на нашем сайте.

По Москве доставка осуществляется собственной курьерьской службой

В любой город России и стран СНГ с помощью ТК «Деловые линии», «СДЭК», DPD

Возможен самовывоз товара из нашего офиса, находящегося по адресу: МО, г. Пущино, микрорайон «Д», д.20А, пом. 4Б
Схема проезда

Доставка до терминалов ТК «Деловые линии», «СДЭК», DPD производится бесплатно.

Продукция, поставляемая компанией Пущинские Лаборатории, отвечает заявленным техническим характеристикам, транспортируется согласно условиям, рекомендованных производителями. По требованию клиента на все реактивы предоставляется сертификат анализа (на бумажном носителе или в электронном виде).

На оборудование, поставляемое компанией Пущинские Лаборатории, распространяется гарантийное и пост гарантийное обслуживание, согласно гарантийному талону и условиям производителя. В случае необходимости, в комплекте с прибором предоставляются регистрационное удостоверение и сертификат соответствия (при его наличие на данный товар).

Получить консультацию Вы можете по телефону 8 (499) 110-03-07 или отправьте запрос на info@laboratorii.com.

Компания «Пущиские лаборатории» работает с физическими и юридическими лицами.
Физическое лицо (частный покупатель) может приобрести у нас товар:

  • В интернет-магазине или из каталогов производителей, размещенных на сайте, по безналичной форме оплаты товара.
  • Для формирования квитанции для оплаты в любом банке вам необходимо обратится в отдел продаж по телефону 8(499) 110-03-07 или написать письмо по электронной почте info@laboratorii.com
  • Оплата доставки товара может быть включена в стоимость товара. Также вы можете вызвать транспортную компанию или самостоятельно забрать товар со склада в городе Пущино, часы работы указаны на сайте laboratorii.com.
  • При наличии товара на складе, вы можете забрать его в рабочее время после поступления денежных средств на расчетный счет. Наличие товара нужно уточнить у менеджеров.
  • При приобретении товаров в интернет-магазине, выбранная вами позиция поставляется под заказ (нет в наличии), выставляется счет на оплату, заключается договор поставки товара. Поставка заказных позиций осуществляется после 100% предоплаты, срок постаки оговаривается с менеджером по продукции и прописывается в договоре.

Юридическое лицо может приобрести у нас товар товар:

источник

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: HiMedia Laboratories

Вид упаковки: полиэтиленовая банка

Агаровая и бульонная (M503) среды Левина с эозиновым красителем и метиленовым голубым рекомендованы для выделения и дифференциации грамотрицательных микроорганизмов кишечной группы (БГКП) из клинического и другого материала. Поставляется в гранулированной форме, что значительно сокращает «пыление», загрязнение поверхностей и попадание мелких частиц порошка в дыхательные пути персонала. Гранулы свободно пересыпаются, быстро растворяются, сокращая до минимума трудозатраты на приготовление культуральных сред

Пропись среды впервые предложена Holt-Harris и Teague, а затем модифицирована Levine. Приведенный состав является их комбинацией, включает пептический перевар животной ткани, фосфат по Левину и два углевода, предложенные первыми авторами. Красители метиленовый синий и эозин в соотношении 1:6, в определенной степени подавляют рост грамположительных микроорганизмов, а так же являются дифференцирующими индикаторами ферментации углеводов. Сахароза добавлена в качестве альтернативного субстрата для типичных грамотрицательных бактерий, ферментирующих лактозу медленно или неферментирующих ее.
Колиформные микроорганизмы образуют на этой среде лилово-черные колонии в соответствии с окраской указанных индикаторов при низких значениях рН. Комплекс красителей при этом сорбируется колонией. Неферментирующие микроорганизмы вероятно повышают рН окружающей среды за счет окислительного дезаминирования белка, что ведет к растворению комплекса метиленовый синий – эозин и формированию бесцветных колоний.
В присутствии эозина и метиленового синего не могут расти некоторые штаммы сальмонелл и шигелл. Для идентификации выделенных культур требуется проведение дополнительных уточняющих тестов

Состав, грамм/литр:
Пептический перевар животной ткани 10,0;
Калия гидрофосфат 2,0;
Лактоза 5,0;
Сахароза 5,0;
Эозин Y 0,4;
Метиленовый синий 0,065;
Агар-агар 13,5.
Конечное значение рН (при 25°С) 7,2 ± 0,2.
Внешний вид: гомогенный сыпучий светло-лиловый порошок. Готовая среда красновато-лиловую окраску, опалесцирует с зеленоватым оттенком, соответствует по плотности 1,35%-ному агаровому гелю.
Форма выпуска: непрозрачные водоотталкивающие пластиковые флаконы с навинчивающимся колпачком, который имеет внутреннюю крышку.
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке.
Готовую среду хранить при температуре +2…8°С в темноте.
Этикетка на упаковке на русском языке, содержит инструкцию по применению. Зарегистрировано в МЗ и СР РФ

источник

Эти среды рекомендуют для выделения и дифференциации грамотрицательных микроорганизмов кишечной группы из клинического и другого материала.

EMB Agar (M317) Рост Escherichia coli

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Размешать 36,0 г порошка М317 или 22,5 г порошка М503 в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть для полного растворения частиц. Разлить в соответствующие емкости. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ. Остудить до 50°С и встряхнуть для окисления метиленового синего (чтобы восстановить его синий цвет и размешать хлопьевидный преципитат). Если среда используется в тот же день, ее можно не автоклавировать.

Предупреждение: среду надо хранить в темноте, чтобы не допустить ее окисления на свету.

Эта среда впервые предложена Holt-Harris и Teague (1), а затем модифицирована Levine (2). Приведенные прописи являются комбинацией указанных сред: в их состав входит Пептический перевар животной ткани и фосфат по Левину и два углевода, предложенные первыми авторами.

Метиленовый синий и эозин в определенной степени подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Данные красители служат в качестве дифференцирующими индикаторами ферментации углеводов. Соотношение эозина и метиленового синего доведено примерно до 6:1. Сахароза добавляется в среду в качестве альтернативного углевода для типичных грамотрицательных бактерий, ферментирующих лактозу медленно или иногда не ферментирующих ее. Колиформные микроорганизмы образуют на этой среде лилово-черные колонии в соответствии с окраской указанных индикаторов при низких значениях рН. Комплекс красителей при этом сорбируется материалом колонии. Неферментирующие микроорганизмы вероятно повышают рН окружающей среды за счет окислительного дезаминирования белка, что ведет к растворению комплекса метиленовый синий–эозин и формированию бесцветных колоний (3). В присутствии эозина и метиленового синего не могут расти некоторые штаммы сальмонелл и шигелл. Для дальнейшей идентификации выделенных культур требуется проведение дополнительных тестов.

Гомогенный сыпучий светло-лиловый порошок.

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,35%-ному агаровому гелю (М317).

Готовая среда имеет красновато-лиловую окраску, опалесцирует с зеленоватым оттенком, если в чашках Петри или пробирках формируется гель.

При 25°С водные растворы М317 (3,6% вес/об) или М503 (2,25% вес/об) имеют рН 7,2 ± 0,2.

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35°С.

источник

ЛЕВИНА СРЕДА (M. Levine, амер. бактериолог, род. в 1889 г.; син. агар с эозином и метиленовым синим) — цветная элективная питательная среда для дифференцирования бактерий сем. Enterobacteriaсеае, используется при лабораторной диагностике дизентерии, брюшного тифа, сальмонеллезов и других кишечных инфекций. Впервые агар с эозином и метиленовым синим был предложен в 1916 г. Холт-Харрисом и Тигом (J. E. Holt-Harris, О. Teague), позднее, в 1918 г., состав среды был модифицирован Левином.

Л. с. наряду с другими твердыми цветными дифференциально-диагностическими питательными средами для энтеробактерий нашла широкое применение в лаб. практике. С ее помощью удается в сравнительно большом проценте случаев обнаружить патогенную лактозонегативную микрофлору. Готовая Л. с. довольно стабильна, не изменяет своих свойств на свету или при хранении на протяжении нескольких дней; при ее изготовлении не требуется точного установления концентрации водородных ионов (pH). Входящие в состав Л. с. органические красители избирательно задерживают рост грамположительных бактерий, благодаря чему она одновременно является средой обогащения и дает относительно лучшие результаты при непосредственном посеве исследуемого материала, даже если он содержит сравнительно малое количество патогенных бактерий.

В зависимости от качества отдельных ингредиентов (пептона и в особенности красителей) получаемые на Л. с. результаты могут несколько варьировать, поэтому при изготовлении каждой новой серии среды желательно использование материалов одной и той же марки, что значительно облегчает распознавание колоний.

Известно несколько прописей и способов приготовления Л. с. (Ю. А. Козлов, Г. Я. Синай, О. Г. Биргер и др.). Наибольшее распространение получил способ, при к-ром раздельно готовят основную среду, р-ры лактозы и красителей, пригодные для сохранения впрок и смешиваемые перед употреблением.

Основная среда состоит из 10 г бактериологического пептона, 15 г агар-агара, 2 г фосфата калия двузамещенного (K2HPO4) и 1 л дистиллированной воды. Ее стерилизуют в автоклаве при 1 ат 15—20 мин., pH не исправляют.

При приготовлении дифференциальной среды на каждые 100 мл расплавленной основной среды при постоянном помешивании добавляют приготовленные на дистиллированной воде и предварительно простерилизованные текучим паром (дробно, 3 дня подряд по 15—20 мин.) следующие р-ры в приведенной последовательности 5 мл 20% р-ра медицинской лактозы, 2 мл 2% р-ра эозина щелочного (бактериологического), 1,5 мл 0,5% р-ра метиленового синего. Готовую среду разливают в чашки Петри, слегка подсушивают и используют как обычно. Цвет среды сине-фиолетовый.

Колонии кишечной палочки на Л. с. небольшие, округлые, с гладкой блестящей поверхностью, темно-синего (до черного) цвета, иногда с металлическим блеском. Молодые колонии мутноватые, непрозрачные, могут быть окрашены только в центре. Колонии возбудителей дизентерии, брюшного тифа и паратифов относительно более мелкие, круглые, блестящие и прозрачные, обычно совершенно бесцветные (молодые) или с легким розоватым или голубоватым оттенком. Колонии протея ползучего роста не дают; они небольшие, изолированные, оранжево-желтого цвета. Среда меняет свой цвет только вокруг колоний протея.

Некоторые авторы рекомендуют увеличивать количество 0,5% р-ра метиленового синего до 2 мл на 100 мл основной среды или исключать из ее состава фосфатный буфер. Можно готовить среду не с пептоном, а на основе перевара Хоттингера, при pH 7,2—7,3 с добавлением соответствующего прописи количества агара и фосфорнокислого калия. Применение мясной воды для приготовления среды недопустимо, дифференциация колоний в этом случае значительно ухудшается.

Известен способ приготовления сухой Л. с., очень стабильной по качеству и особенно удобной для длительного хранения и в условиях экспедиционной работы (Н. В. Плоскирев).

Стабильная сухая Л. с. выпускается промышленностью, инструкция по ее изготовлению и применению рассылается вместе со средой. Большинство диагностических лабораторий применяет для выделения и дифференцирования патогенных энтеробактерий высококачественные стандартные элективные сухие питательные среды отечественного производства — Л. с., бактоагар Ж, среду Плоскирева (см. Плоскирева среда).

Библиография: Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, с. 110, М., 1973; Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М. О. Биргера, с. 58, М., 1973; Levine М. The effect of concentration of dyes on differentiation of enteric bacteria on eosin- methylene- blue agar, J. Bact., v. 45, p. 471, 1943.

источник

Фармацевтика, медицина, биология

Среда Левина — питательная среда для выделения, подсчета и различия грамотрицательных микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae.

  • пептон
  • Калия фосфат
  • лактоза
  • Эозин Y
  • Метиленовый синий
  • Агар-агар

Среда имеет pH около 7 и сохраняется в темноте. Готовая среда имеет красновато-сиреневое окраски, неопалесцирующий с зеленоватым оттенком и легким преципитатом, если в чашках Петри формируется гель.

Эта среда разработана американским микробиологом Левином (Levine) и используются для дифференциации Escherichia coli и Enterobacter aerogenes, а также для быстрой идентификации грибов Candida albicans. Американские микробиологи рекомендуют это среда для выделения, подсчета и розрзнення грамотрицательных микроорганизмов кишечной (колиформные) группы. Метиленовый синий и эозин в определенной степени подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Эти красители служат в качестве индикаторов расщепления лактозы. На этой среде могут расти в виде точечных колоний дрожжи и некоторые грам-положительные бактерии, например, энтерококки.

Микробиолог Велд (Weld) предложил использовать агар Левина с добавлением хлор-тетрациклина гидрохлорида для быстрой идентификации грибов Candida albicans в клиническом материале. Выявление этих грибов в таком материале, как фекалии, оральный и вагинальный секрет, ногти, чешуйки кожи и другое возможно через 24-48 часов при инкубации при 35-37 ° С в атмосфере, содержащей 10% углекислого газа. Однако культуральные свойства грибов при этом варьируют.

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35-37 ° С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС) Рост

Escherichia coli (25922) Обильный

Pseudomonas aeruginosa (27853) Обильный

Salmonella typhimurium (14028) Обильный

Candida albicans (10231) Хороший или обильный (в атмосфере с 10% углекислого газа)

Enterobacter aerogenes (13048) Хороший

Staphylococcus aureus (25923) Слабый или отсутствует

Saccharomyces cerevisiae (9763) Слабый или отсутствует

Enterococcus faecalis (29212) Подавляется

источник

Питательная среда предназначена для выделения и дифференциации патогенных и условно патогенных энтеробактерий, а также для выделения стафилококков.

Представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный порошок светло-сиреневого цвета.

Панкреатический гидролизат рыбной муки, дрожжевой экстракт, лактоза, натрия фосфат двузамещенный, натрия хлорид, эозин-Н, метиленовый синий, агар.

Приготовление:

Препарат в количестве, необходимом для приготовления конкретной серии питательной среды, размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят в течение 3 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют автоклавированием при температуре 110 °С в течение 20 мин. Стерильную среду охлаждают до температуры 45-50 °С, разливают в стерильные чашки Петри слоем 5-6 мм. После застывания среды чашки подсушивают при температуре (37±1)°С в течение 40-60 мин.

Готовая среда в чашках Петри прозрачная, от светло-сиреневого до красновато-коричневого цвета.

Стерильную среду можно использовать в течение 3-х дней при условии ее хранения при температуре
2-8 C.

Принцип действия:

Наличие в среде эозина и метиленового синего придают среде селективные свойства.

Дифференцирующая способность среды основана на изменении рН среды под действием кислоты, образующейся при ферментации бактериями лактозы. Комплекс индикаторов в кислой зоне окрашивает колонии кислотообразующих бактерий в темно-фиолетовый цвет, некоторые колонии имеют зеленоватый металлический блеск.

Проведение анализа:

Исследования образцов проводятся по соответствующим Методическим указаниям и ГОСТам.

Исследуемый материал стерильным шпателем тщательно втирают по всей поверхности среды (при необходимости делают разведения). Инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 24-48 ч.

источник

Читайте также:  Лекарство никотиновая кислота показания к применению